[发明专利]一种卡利普多人工抗原及其多抗和应用

说明书

本发明公开一种卡利普多人工抗原及其多抗和应用。一种卡利普多人工抗原KAL‑BSA，其特征在于对卡利普多进行化学修饰，偶联BSA获得能诱导B细胞的增殖和分化继而产生特异性抗体的人工抗原。抗卡利普多多克隆抗体，通过采集免疫卡利普多人工抗原KAL‑BSA的动物血清，再通过两步亲和层析法获得。修饰偶联后的KAL‑BSA免疫抗原特异性好，能刺激动物产生大量抗卡利普多多克隆抗体，而非其他不需要的抗体，为后续纯化提供便利。抗卡利普多多克隆抗体通过BSA亲和柱和BGG亲和柱的纯化，在不大幅降低抗体效价灵敏度的情况下，进一步提升灵敏度(检测限可达100ng/ml)，提高纯度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种卡利普多人工抗原及其多抗和应用。

背景技术

卡利普多(Carisoprodol)是一种肌肉松弛剂类药物，主要用于治疗慢性背痛。卡利普多是一种临床处方药。在人体中卡利普多由CYP2C19酶通过N-脱烷基作用(N-dealkylation)转化为其活性代谢物氨甲丙二酯(眠尔通,安宁，meprobamate)。卡利普多代谢为其活性代谢物氨甲丙二酯的速度与CYP2C19酶多态性有关。CYP2C19基因多态性能影响卡利普多的药代动力学。

卡利普多的分子式：C₁₂H₂₄N₂O₄，分子量：260.33，CAS RN 78-44-4,其分子结构如式(I)：

式(I)

目前对卡利普多滥用的报道较为少见，但仍需引起注意，尤其是对那些有物质依赖倾向的患者。尽管卡利普多在治疗背痛和活化患者方面被证明很有效，但其被滥用的潜力和其过量服用的毒副作用却也招致很多批评。卡利普多常见的副作用包括头晕、嗜睡、恶心和心理损伤。

目前市面上没有可用于检测卡利普多的快速诊断试纸，也没有可用的卡利普多免疫抗原以及高效价，特异性强的抗卡利普多多克隆抗体。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种卡利普多人工抗原。

卡利普多本身分子量太小，不具有免疫原，即缺乏T细胞表位而无法诱导动物机体产生特异性抗体，因此本发明对卡利普多进行修饰，偶联BSA(牛血清白蛋白)，获得能诱导B细胞的增殖和分化，继而产生特异性抗体的人工抗原。

卡利普多人工抗原KAL-BSA的合成方法，具体如下：

步骤(1)、碳化二亚胺EDC交联剂平衡到室温；

步骤(2)、将BSA(牛血清白蛋白)加入到偶联缓冲液，得到载有BSA的偶联缓冲液；其中偶联缓冲液为0.1M MES，其pH值为4.8-5.0；

步骤(3)、将卡利普多半抗原溶解到载有BSA的偶联缓冲液，用以导入载体蛋白BSA；

步骤(4)、将EDC加入到上述卡利普半抗原和BSA混合的偶联缓冲液中；

步骤(5)、室温反应2小时，用脱盐柱纯化偶联蛋白，获得KAL-BSA；

步骤(6)、无菌过滤后-20℃保存。

本发明的第二个目的是提供高效价、特异性强的抗卡利普多多克隆抗体。KAL-BSA免疫新西兰大耳兔过程中，不仅产生了抗卡利普多多克隆抗体，也会产生抗BSA抗体及其他杂蛋白，影响最终抗体的特异性和纯度。

本发明采用创新的两步亲和层析法，可在不大影响抗卡利普多多克隆抗体效价，灵敏度同时进一步提升其特异性及纯度，使其能更好的应用于检测卡利普多胶体金免疫诊断试纸条。

抗卡利普多多克隆抗体的制备方法如下：