[发明专利]耐热的I型普鲁兰酶的突变体酶及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202010715201.5 | 申请日： | 2020-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN111808836B | 公开（公告）日： | 2021-12-07 |
| 发明（设计）人： | 逄晓阳;吕加平;杨洋;芦晶;张书文;李伟勋;朱青;徐琛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院农产品加工研究所 |
| 主分类号： | C12N9/44 | 分类号： | C12N9/44;C12N15/56;C12N1/21;C12N15/70;C12P19/04;C12P19/16;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 卞静静 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 耐热 型普鲁兰酶 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.耐热的I型普鲁兰酶的突变体酶，其特征在于，所述突变体酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。
2.编码权利要求1所述的突变体酶的基因，其特征在于，编码所述突变体酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
3.包含编码权利要求1所述的突变体酶的基因的工程菌。
4.包含编码权利要求1所述的突变体酶的基因的载体。
5.制备如权利要求1所述的突变体酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、以携带I型普鲁兰酶基因的载体为模板，使用设计的突变引物对，利用PCR突变方法，进行点突变反应，得到带有突变体酶基因的突变质粒，其中，I型普鲁兰酶为普鲁兰酶PulF，编码普鲁兰酶PulF的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述突变引物对分别为：
F：5′-CGGCGTGGGCAATGTTATCGCGACCGAACGT-3′和R：5′-GATAACATTGCCCACGCCGCTTTCATTCAGATACG-3′；
步骤二、将步骤一中得到的突变质粒转化可表达目的基因的工程菌中，随工程菌的复制表达对应的突变体酶。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤一中的点突变反应条件为：94℃预变性5min；94℃解链20 s，65℃退火20 s，72℃延伸4 min，共25个循环；72℃延伸10 min；4℃保温。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤二中的工程菌为大肠杆菌。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤一中的载体为pET-22b(+)。
9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括采用Ni2+亲和层析的方式对突变体酶进行分离纯化。
10.如权利要求1所述的突变体酶在制备酶解含有a-1，6糖苷键的多糖的产品中的应用。
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