[发明专利]制备视网膜色素变性非人哺乳动物模型的方法有效
| 申请号： | 202010715185.X | 申请日： | 2020-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN111979241B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 万晓玲;孙晓东 | 申请（专利权）人： | 上海市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/89;C12N15/90;A61D19/04;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 林青中 |
| 地址： | 200086*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 视网膜 色素 变性 非人 哺乳动物 模型 方法 | ||
1.制备视网膜色素变性非人哺乳动物模型的方法，其特征在于，包括：
将所述动物同源染色体中一条上的内源性ctsd基因替换为h-CTSD*基因；
所述h-CTSD*基因为发生c.262dupC位点变异的人源ctsd基因。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用Crispr-Cas9系统将所述内源性ctsd基因敲除，并用所述h-CTSD*基因替换敲除的内源性ctsd基因；
其中所述Crispr-Cas9系统包括sgRNA1，sgRNA2和Cas9酶，sgRNA1，sgRNA2所对应的靶位点序列为SEQ ID NO:1和2所示；
所述h-CTSD*基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述h-CTSD*基因还连接有报告基因或编码标签蛋白的序列。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述h-CTSD*基因替换敲除的内源性ctsd基因的方法为同源重组。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述h-CTSD*基因两侧添加核苷酸序列分别如SEQ ID NO:4和5所示左侧同源臂和右侧同源臂以实现同源重组。
6.根据权利要求2～5任一项所述的方法，其特征在于，所述基因敲除和h-CTSD*基因替换处理的对象为受精卵的内源性ctsd基因。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas9系统和所述h-CTSD*基因转入所述受精卵的方法为显微注射。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将处理后受精卵移植到假孕雌 性动物体内并产出F0代，将正确表达h-CTSD*基因的F0代动物与野生型动物交配获得F1代。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为啮齿类动物。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述非人哺乳动物是小鼠(Musmusculus)。
11.权利要求1～10任一项所述方法得到的动物在鉴别和/或测试药物中的用途；
所述药物用于预防和/或治疗的适应症为视网膜色素变性和/或治疗与视网膜色素变性相关的并发症。
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