[发明专利]检测大肠杆菌的特异性LAMP引物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202010711226.8 | 申请日： | 2020-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN111676305A | 公开（公告）日： | 2020-09-18 |
| 发明（设计）人： | 邓光存;马臣杰;吴晓玲;王玉炯;张小雨 | 申请（专利权）人： | 宁夏大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京久维律师事务所 11582 | 代理人： | 杜权 |
| 地址： | 750021 宁夏回族*** | 国省代码： | 宁夏;64 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 大肠杆菌 特异性 lamp 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种检测大肠杆菌的环介导等温扩增(LAMP)引物，其特征在于，包括6条引物，所述6条引物针对大肠杆菌fecA基因(GenBank:M63115.1)的保守序列设计；所述6条引物包括F3、B3、FIP、BIP、LF和LB，F3的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.1所示，B3的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.2所示，FIP的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.3所示，BIP的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.4所示，LF的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示，LB的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示。
2.一种检测大肠杆菌的环介导等温扩增(LAMP)试剂盒，其特征在于，包括：40uM的F30.08μL，40uM的B30.08μL，100uM的FIP 0.32μL，100uM的BIP 0.32μL，80uM的LF 0.1μL，80uM的LB 0.1μL,F3和B3、FIP和BIP以及LF和LB为环介导等温扩增引物，F3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，B3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示，FIP的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示，BIP的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示，LF的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示，LB的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示。
3.根据权利要求2所述的检测大肠杆菌的环介导等温扩增(LAMP)试剂盒，其特征在于，还包括10×Isothermal Amplification Buffer 2μL，8U/μL Bst2.0DNA聚合酶1μL，100mMMgSO4 0.8μL，5M甜菜碱0.8μL，10mM dNTP 2.4μL和0.8μL荧光染料，其中10×IsothermalAmplification Buffer反应缓冲液含有100mM氯化钾、100mM硫酸铵、200mM pH8.8 Tris-HCl、1％Triton X 100、20mM硫酸镁。
4.根据权利要求3所述的检测大肠杆菌的环介导等温扩增(LAMP)试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为终浓度16mM/L的钙黄绿素水溶液。
5.一种检测大肠杆菌的方法，包括：
提取待检测样品基因组DNA；
构建包括以下引物的反应体系：F3、B3、FIP、BIP、LB和LF，其中，F3的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.1所示，B3的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.2所示，FIP的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.3所示，BIP的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.4所示，LF的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示，LB的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示；
进行扩增反应；
通过反应体系的颜色变化来确定是否存在大肠杆菌。
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