[发明专利]马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究

权利要求书

1.一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于该方法包括步骤如下：

步骤1，按照马齿苋多糖与高碘酸钠的质量比为1:（1~1.5）各自溶解在水溶液中，在反应温度为25~50℃及磁力搅拌器下搅拌25~50h的情况下，溶液的颜色逐渐由红棕色变为浅黄色，反应充分后，透析得到含醛基的马齿苋多糖；

步骤2，测定马齿苋多糖中醛基的含量，按照醛基与阿仑膦酸钠的物质的量比为1:1（0.5g:0.623g）分别溶于HAc/NaAc（pH=4~6）缓冲溶液中，反应温度为25~50℃，搅拌48h，透析得到POP-ALN偶联物，然后冷冻真空干燥；

步骤3，将180mg的马齿苋多糖-阿仑膦酸钠偶联物和45mg的顺铂配合物混合，在温度范围为25~40℃，搅拌反应48h，透析冷冻干燥得POP-ALN-CIS-Pt偶联物，制备过程以式一所示：

式一

POP-ALN-CIS-Pt偶联物抗肿瘤活性和免疫活性研究方法如下：

将人正常肝细胞（LO-2）和人宫颈癌细胞（HeLa）分别加入含100μL的1640培养液和DMEM培养液，在37℃恒温培养箱中孵育贴壁生长24h，各自加入100μL不同浓度梯度的样品溶液，48h后加入MTT（20μL，5mg/mL），放入恒温培养箱继续培养4h，待细胞沉淀为紫色，除去上清液，用200µL二甲基亚砜溶液溶解紫色沉淀，摇床摇匀后测定吸光度，计算细胞IC₅₀值；

将含HeLa的DMEM培养液加入20mm共聚焦皿中，在37℃恒温培养箱中孵育贴壁生长，当细胞密度为50-60%时，加入各样品溶液（IC₅₀值作为各样品的最终浓度），连续培养24h，然后，弃掉上清液，固定细胞后，依次在两种抗体中孵育，用冷的PBS冲洗，用DAPI标记细胞核后，在蔡司共焦显微镜（LMS710，Germany）上采集图像，使用ZentM178软件操作处理图像。

2.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于：步骤1中，马齿苋多糖和高碘酸钠的质量比为1:（1~1.5）。

3.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于：步骤1中，马齿苋多糖和高碘酸钠混合后反应温度为25~50℃。

4.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于，步骤2中，所配制的HAc/NaAc缓冲溶液的pH在4~6。

5.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于：步骤2中，含醛基的马齿苋多糖HAc/NaAc缓冲溶液与阿仑膦酸钠的HAc/NaAc缓冲溶液，反应温度在30~50℃。

6.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于：步骤3中，制备POP-ALN-CIS-Pt偶联物的反应温度25~40℃。

7.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于：细胞毒性实验中加药的时间为12~48h。

8.根据权利要求1所述的一种马齿苋多糖与顺铂复合物的制备及其协同抗肿瘤活性研究，其特征在于：所加入的多糖复合药物能够对人宫颈癌细胞产生免疫作用。