[发明专利]一种基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法

权利要求书

1.一种基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下操作：

1)将能够与大肠杆菌特异性结合的单克隆抗体用包被液稀释后，包被检测板，然后于4℃下放置16～24h；

2)将大肠杆菌与基质混合制成梯度浓度的检测液，以进行标准指纹图谱的检测；

将待测样品制成流质的待测液；

3)将检测液、待测液分别加入到包被后的检测板中，37℃孵育0.8～2h，然后洗涤、风干；

用太赫兹时域光谱装置分别对检测板中检测液和待测液所孵育的板孔进行检测，以获取大肠杆菌太赫兹标准指纹图谱库和样品太赫兹吸收谱图；

在检测时，太赫兹波设置为：频率范围0-2.5THz、输出波长800nm、光谱宽度＞50nm、重复频率80MHz±1Hz、脉冲宽度≦50fs、光束直径1～2mm；

4)对照大肠杆菌太赫兹标准指纹图谱库和样品太赫兹吸收谱图，进行大肠杆菌的定性鉴别和/或半定量检测。

2.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，在检测时，太赫兹时域光谱装置的飞秒激光脉冲经过偏光分束镜分为两束，一束作为泵浦光入射到太赫兹发射器上，产生太赫兹脉冲，此脉冲被抛物面镜聚焦到待测量的样品上；另一束为探测光，其与透射样品后的太赫兹电磁脉冲共线经过探测器；调整时间延迟装置产生不同达时间的探测光，测量太赫兹电场强度的变化量；探测器检测的信号经电流前置放大、数字信号处理器后进行图像还原，获得太赫兹脉冲的时域波形光谱图；

根据以下折射率、吸收系数的转换得到太赫兹吸收谱图；

折射率：

吸收系数：

其中，d为样品厚度，由游标卡尺测出；ω为频率，c为光速，T(ω)为检测液的频域信号；为电场相位。

3.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，所述的单克隆抗体是采用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，将该抗体包被ELISA板。

4.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，所述的基质为PBS缓冲液或待测液；

当待测样品为饮料或流质食品时，将稀释若干倍后的饮料或流质食品作为待测液；

当待测样品为固质食品时，将其用缓冲液浸泡后打浆，然后再稀释若干倍数后得到待测液。

5.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，在检测时，测试环境为室温氮气下，空气湿度范围为4％～40％，大肠杆菌及单克隆抗体的太赫兹吸收光谱的频率范围0～2.5THz。

6.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，所述大肠杆菌的定性鉴别为：

以只包被了抗体的聚苯乙烯微孔板为空白对照，以频率为横坐标，吸收系数为纵坐标，测定太赫兹光谱；当待测液的太赫兹光谱中出现大肠杆菌的特征性吸收峰时，则该待测液中的大肠杆菌检测为阳性。

7.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，所述大肠杆菌的半定量检测为：

将已知浓度的大肠杆菌用PBS缓冲液做梯度稀释，37℃反应1h，纯水洗并风干后，测定梯度浓度大肠杆菌的太赫兹光谱并绘制频域谱和吸收谱；

以只包被了抗体的的聚苯乙烯微孔板为空白对照，以频率为横坐标，吸收系数为纵坐标，测定待测液的太赫兹光谱；

比较待测液的太赫兹光谱与梯度浓度大肠杆菌的太赫兹光谱的特征性吸收峰，根据待测液的特征性吸收峰的纵坐标，得到所含大肠杆菌的梯度浓度区间，实现大肠杆菌半定量检测。

8.如权利要求1所述的基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，其特征在于，所述大肠杆菌的检测下限浓度达到0.03μg/ml。