[发明专利]一种基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法

说明书

本发明公开了一种基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法，抗大肠杆菌的单克隆抗体的制备和联合应用太赫兹波和特异性抗体在复杂食品基质中快速检测大肠杆菌的有效技术方法建立。所述的抗大肠杆菌单克隆抗体的制备是将大肠杆菌作为免疫原，采用常规杂交瘤技术得到大肠杆菌的单克隆抗体，将该抗体包被ELISA板，与含有大肠杆菌的复杂食品基质共孵育、洗涤并风干后进行太赫兹波检测。该方法应具有准确性高，灵敏度好，检测快速方便的特点。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，涉及一种基于太赫兹波快速检测大肠杆菌的方法。

背景技术

由病原微生物引起的食源性疾病是全世界关注的食品安全问题，也是疾病安全防控的重要内容之一。此类疾病传染性强，危害大，严重威胁人类健康。例如上世纪80年代上海因为生吃毛蚶引起30万人甲肝流行；2001年江苏及安徽因大肠杆菌O157：H7感染引发2万人中毒，177人死亡。

食品生产时间长，环节多，存在着许多被致病性微生物污染的可能性。作为原料来源的活体就可能带有致病性微生物；在加工过程中原料之间的交叉污染；加工者携带的致病性微生物也可能进入食品；在销售中会通过器具和其它途径污染致病性微生物。总之，与食品有直接和间接关系的致病性微生物都可能污染食品，这是一个复杂的致病性微生物群体。常见的有：沙门氏菌、葡萄球菌、链球菌、副溶血性弧菌、变形杆菌、志贺氏菌、禽流感病毒、黄曲霉菌及病毒、口蹄疫病毒等。因此，为了保证人民食品安全，建立早期快速检测方法对预防控制此类疾病的发生发展具有重大意义。

随着研究的日益深入，在微生物检测方面被广泛使用的方法有微生物代谢物检测技术(电阻抗法、ATP生物发光法、微热量计技术)、微生物免疫学检测技术(酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术、免疫试纸技术)、微生物DNA检测技术(实时荧光定量PCR、环介导等温扩增技术)。上述方法中电阻抗法、ATP生物发光法、微热量计技术对于特定病原微生物的鉴别能力较差，胶体金免疫层析技术、免疫试纸技术等敏感性较差，酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR等敏感性强、特异性好，但检测用时较长。

电阻抗法是对待测样品中微生物含量进行定性定量分析的一种微生物检测方法。其原理是基于微生物生长繁殖伴随的代谢会引起培养基电特性变化，进而通过电板连续性对培养基的电阻抗进行测量，便可知道某种细菌在特定的培养基中的生长繁殖情况，但由于食品中微生物种群庞大，互相干扰严重，导致电阻抗法测定的结果准确性较差。

ATP生物发光法的基本原理是基于死菌和活菌的ATP含量差别进行检测。活的菌体中ATP的含量是恒定的，而细菌死亡后，由于细胞内酶的作用，菌体中的ATP将迅速被分解掉。因此可以通过测定待测菌体中ATP的浓度从而计算出活菌数。然而，缺点在于其受到盐分及其他化学物质、游离态等非目标的干扰，如果忽略这些干扰因素，必然会使检测结果受到影响，而且此方法不能区分致病性微生物与非致病性微生物的ATP。

微热量计技术的基本原理是测定细菌生长时热量的变化而实现对细菌的检测。不同的细菌产生的热曲线因其各自的新陈代谢不同而不同，在实际检测中用微量热计测量细菌在生长过程中产生的热量，绘制成以产热量和时间组成的热曲线图，通过和已知微生物热曲线进行比较从而达到对细菌的检测。然而，此种方法耗时长，测量误差大，无法实现微量致病微生物的检测。

检测微量物质的固相免疫测定方法(称为酶联免疫吸附试验)于1971年被瑞典学者Engvail和Perlmannn，荷兰学者VanWeerman和Sehuurs分别报道。最初的免疫酶测定是使酶与抗体或抗原结合以检查组织中相应的抗原或抗体的存在。经过优化发展，成为目前应用最广的酶联免疫吸附试验(ELISA)。检测病原微生物多用双抗体夹心ELISA方法。首先将病原微生物特异性抗体吸附于固相载体上(多使用聚苯乙烯微孔板)，然后加入待检样品，最后加入酶标记的检测抗体，洗涤后显色，用分光光度计进行结果判定分析。ELISA检测结果较为可信，检测样品一般需要3-5小时。