[发明专利]酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂及其制备方法以及酪蛋白钙磷微球的制备方法

说明书

本发明提出一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂及其制备方法以及酪蛋白钙磷微球的制备方法，本发明采用新型材料酪蛋白钙磷微球，提升了传统胶原填充剂的有效性和维持时间，生物安全性高，且能够刺激自身胶原蛋白的表达，具有极高的应用前景和价值。本发明使用去端肽动物胶原蛋白或基因重组人胶原蛋白，材料免疫原性低，材料采购/制备成本低，适合大规模工业化生产。本发明在填充剂中加入辅助成分，如甘油或小分子透明质酸，能够改善填充剂的流变特性，使其填充性能更强且更容易注射。本发明提供的工艺具有应用前景广阔，成本低，不产生有害废物，能够工业化生产，实用性高等优点。

技术领域

本发明涉及医用材料技术领域，尤其涉及一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂及其制备方法以及酪蛋白钙磷微球的制备方法。

背景技术

酪蛋白是一种两亲性含磷蛋白，包括大量的谷氨酸和天冬氨酸残基及少量的磷酸化的丝氨酸残基，采用酪蛋白胶束与无机钙磷成分制备的多孔微球，能够结合形状优势与材料优势，在组织工程以及医疗领域具有广泛应用前景。

胶原蛋白是一种常用的医用填充剂成分，其中去端肽动物胶原蛋白或基因重组人胶原蛋白由于其免疫原性更低，更加适合应用于医用填充剂领域。但目前胶原蛋白填充剂普遍维持时间短，且不能有效刺激自体胶原蛋白的修复，因此有巨大的改进空间。

发明内容

本发明的目的在于提出一种应用范围广，免疫原性低、可以刺激自体胶原蛋白的修复的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂及其制备方法以及酪蛋白钙磷微球的制备方法。

为达到上述目的，本发明提出一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，包括胶原蛋白、酪蛋白钙磷微球和辅助成分。

进一步的，所述胶原蛋白溶液、酪蛋白钙磷微球和辅助成分之间的质量比为7:12:1或5:4:1。

进一步的，所述胶原蛋白为动物源去端肽I型胶原蛋白、动物源去端肽Ⅲ型胶原蛋白、基因重组人I型胶原蛋白和基因重组人Ⅲ型胶原蛋白中的一种或多种的混合物。

进一步的，在多种胶原蛋白的混合物中，I型胶原蛋白与Ⅲ型胶原蛋白的重量比大于9:2。

进一步的，所述辅助成分为藻酸钠、透明质酸、甘油、聚谷氨酸等聚氨基酸、PEG、黄原胶、葡聚糖和壳聚糖中的任意一种或多种的组合。

本发明还提出一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：选取胶原蛋白；

步骤2：对所述胶原蛋白进行去端肽处理；

步骤3：提取去端肽的胶原蛋白；

步骤4：将所述去端肽的胶原蛋白溶于溶剂中，得到胶原蛋白溶液；

步骤5：将所述胶原蛋白溶液、酪蛋白钙磷微球和辅助成分进行混合。

进一步的，在步骤1中，当所述胶原蛋白选取未去端肽的动物源I型胶原蛋白和未去端肽的动物源Ⅲ型胶原蛋白，进行步骤2和步骤3；

当所述胶原蛋白选取去端肽的动物源I型胶原蛋白、去端肽的动物源Ⅲ型胶原蛋白、基因重组人I型胶原蛋白和基因重组人Ⅲ型胶原蛋白，跳过步骤2和步骤3，直接进行步骤4。

进一步的，在步骤2中，使用纯化水漂洗未去端肽的胶原蛋白，以每1-10g 胶原蛋白加入100ml 0.1-1.0mol/L的乙酸溶液，之后加入特异性胃蛋白酶1-10mL 进行搅拌水解，去除端肽；搅拌速度为50-1000RPM，温度10-30℃，水解时间 2-36h。

进一步的，在步骤3中，水解后将溶液离心取澄清液，加入氢氧化钠溶液进行pH调节，待析出杂蛋白等沉淀，取上清液，加入氯化钠溶液进行反复盐析，去除残余化学试剂，取残留白色沉淀为去端肽胶原蛋白。