[发明专利]酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂及其制备方法以及酪蛋白钙磷微球的制备方法

权利要求书

1.一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，其特征在于，包括胶原蛋白、酪蛋白钙磷微球和辅助成分。

2.根据权利要求1所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，其特征在于，所述胶原蛋白溶液、酪蛋白钙磷微球和辅助成分之间的质量比为7:12:1至15:4:1。

3.根据权利要求1所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，其特征在于，所述胶原蛋白为动物源去端肽I型胶原蛋白、动物源去端肽Ⅲ型胶原蛋白、基因重组人I型胶原蛋白和基因重组人Ⅲ型胶原蛋白中的一种或多种的混合物。

4.根据权利要求3所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，其特征在于，在多种胶原蛋白的混合物中，I型胶原蛋白与Ⅲ型胶原蛋白的重量比大于9:2。

5.根据权利要求1所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，其特征在于，所述辅助成分为藻酸钠、透明质酸、甘油、聚谷氨酸等聚氨基酸、PEG、黄原胶、葡聚糖和壳聚糖中的任意一种或多种的组合。

6.一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂的制备方法，制备如权利要求1-5中任意一项所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：选取胶原蛋白；

步骤2：对所述胶原蛋白进行去端肽处理；

步骤3：提取去端肽的胶原蛋白；

步骤4：将所述去端肽的胶原蛋白溶于溶剂中，得到胶原蛋白溶液；

步骤5：将所述胶原蛋白溶液、酪蛋白钙磷微球和辅助成分进行混合。

7.根据权利要求6所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂的制备方法，其特征在于，在步骤1中，当所述胶原蛋白选取未去端肽的动物源I型胶原蛋白和未去端肽的动物源Ⅲ型胶原蛋白，进行步骤2和步骤3；

当所述胶原蛋白选取去端肽的动物源I型胶原蛋白、去端肽的动物源Ⅲ型胶原蛋白、基因重组人I型胶原蛋白和基因重组人Ⅲ型胶原蛋白，跳过步骤2和步骤3，直接进行步骤4。

8.根据权利要求6所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂的制备方法，其特征在于，在步骤2中，使用纯化水漂洗未去端肽的胶原蛋白，以每1-10g胶原蛋白加入100ml 0.1-1.0mol/L的乙酸溶液，之后加入特异性胃蛋白酶1-10mL进行搅拌水解，去除端肽；搅拌速度为50-1000RPM，温度10-30℃，水解时间2-36h。

9.根据权利要求8所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂的制备方法，其特征在于，在步骤3中，水解后将溶液离心取澄清液，加入氢氧化钠溶液进行pH调节，待析出杂蛋白等沉淀，取上清液，加入氯化钠溶液进行反复盐析，去除残余化学试剂，取残留白色沉淀为去端肽胶原蛋白。

10.根据权利要求6所述的酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂的制备方法，其特征在于，在步骤4中，所述溶剂为蒸馏水，所述胶原蛋白溶液的浓度为1-5g/100mL。

11.一种酪蛋白钙磷微球的制备方法，以制备如权利要求1-10中任意一项所述的酪蛋白钙磷微球，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：称取酪蛋白加入至预先配置好的钙盐水溶液中溶解混匀并调节pH至8.0-11.5，得到第一溶液，其中，所述钙盐水溶液的浓度为0.3-3.0moL/L，所述酪蛋白在所述第一溶液中的浓度为1.0-20.0mg/mL；

步骤2：将所述第一溶液与预先配置好的磷酸盐水溶液混合，搅拌，调节pH至8.0-11.5，在10-90℃条件下反应12-48h，提取沉淀，得到第一沉淀物,搅拌速率为50-800rpm；

步骤3：将所述第一沉淀物进行洗涤，得到第二沉淀物；

步骤4：将所述第二沉淀物使用缓冲液进行重悬，得到第二溶液，其中，所述缓冲液为浓度大于10mg/mL的酪蛋白水溶液；

步骤5：将所述第二溶液进行流化床干燥造粒、喷雾干燥或使用杆式研磨机等破碎造粒，即得所述酪蛋白钙磷微球。

12.根据权利要求11所述的酪蛋白钙磷微球的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐水溶液中的磷酸盐与所述钙盐水溶液中的钙的摩尔量比为：4-6：2-4；

钙盐为氯化钙、硝酸钙、碳酸钙、硫酸钙或磷酸钙中的任意一种；所述磷酸盐为磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二铵、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾或磷酸二氢铵中的任意一种。