[发明专利]一种同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒与应用

权利要求书

1.一种同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于其包括：

(1.1)第1.1容器，其中容纳用NSE抗体标记的磁微粒；

(1.2)第1.2容器，其中容纳用CYFRA21-1抗体标记的磁微粒；

(1.3)第1.3容器，其中容纳用ProGRP抗体标记的磁微粒；

(1.4)第1.4容器，其中容纳用SCC抗体标记的磁微粒；

(2.1)第2.1容器，其中容纳与NSE抗体偶联的吖啶酯；

(2.2)第2.2容器，其中容纳与CYFRA21-1抗体偶联的吖啶酯；

(2.3)第2.3容器，其中容纳与ProGRP抗体偶联的吖啶酯；

(2.4)第2.4容器，其中容纳与SCC抗体偶联的吖啶酯；

(3)第三容器，其中容纳NSE抗原低值质控品；

(4)第四容器，其中容纳NSE抗原高值质控品；

(5)第五容器，其中容纳CYFRA21-1抗原低值质控品；

(6)第六容器，其中容纳CYFRA21-1抗原高值质控品；

(7)第七容器，其中容纳ProGRP抗原低值质控品；

(8)第八容器，其中容纳ProGRP抗原高值质控品；

(9)第七容器，其中容纳SCC抗原低值质控品；

(10)第八容器，其中容纳SCC抗原高值质控品。

2.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的磁微粒是粒径为2.8μm的含有活性环氧基团磁微粒。

3.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的抗体标记的磁微粒的制备方法，包含如下步骤：

(1)将磁微粒用PBS洗涤、弃上清后再次悬浮于PBS中，得到磁微粒浓度为5mg/ml的磁微粒稀释液；将相应抗体用PBS稀释后加入到磁微粒稀释液中，混匀，得到磁微粒/抗体稀释液；

(2)在步骤(1)制得的磁微粒/抗体稀释液中加入含3M硫酸铵的PBS，至体系中硫酸铵的终浓度为1M；然后37℃震荡处理16h～24h进行标记；

(3)标记完成后，弃上清液，用含0.1％(w/v)BSA的PBS洗涤，洗涤弃上清后加入0.1％(w/v)BSA和0.5％(v/v)Tween20的PBS中，得到用相应抗体标记的磁微粒，其中磁微粒的终浓度5mg/ml。

4.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

步骤(1)中所述的抗体用量为1mg磁微粒中加入抗体20～30μg。

5.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的吖啶酯为吖啶琥珀酰亚胺酯。

6.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的与相应抗体偶联的吖啶酯的制备方法，包含如下步骤：

将吖啶琥珀酰亚胺酯用二甲基甲酰胺溶解，得到吖啶琥珀酰亚胺酯稀释液；将抗体用PB稀释，得到抗体稀释液；将吖啶琥珀酰亚胺酯稀释液与抗体稀释液混合，搅拌反应30min，然后加入赖氨酸进行封闭，最后透析，得到与相应抗体偶联的吖啶酯。

7.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的吖啶琥珀酰亚胺酯稀释液和抗体稀释液混合后，吖啶琥珀酰亚胺酯和抗体的质量比为1:100。

8.根据权利要求1所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的NSE抗原、CYFRA21-1抗原、ProGRP抗原和SCC抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1～4所示。

9.权利要求1～8任一项所述的同时检测肺癌四种肿瘤标志物的试剂盒在制备用于同时检测样品中NSE、CYFRA21-1、ProGRP、SCC抗原方法的产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

同时检测样品中NSE、CYFRA21-1、ProGRP、SCC抗原的方法依次包括：

(1)将待测样品、NSE、CYFRA21-1、ProGRP、SCC抗原低值和高值质控品分别加入各自对应杯孔中；其中，待测样品设置平行四个处理，每个质控品也平行设置4个处理；

(2)将第2.1容器、第2.2容器、第2.3容器、第2.4容器中的抗体偶联的吖啶酯稀释后分别加入步骤(1)中含待测样品的四个杯孔中，各质控品同样处理；

(3)将第1.1容器、第1.2容器、第1.3容器、第1.4容器的磁微粒混合后，加入步骤(1)含待测样品的四个杯孔中，37℃温育20min，各质控品同样处理；

(4)施加磁力以吸住磁微粒，弃去孔中液体并洗涤；

(5)向各孔中同时滴加第一激发液和第二激发液，用闪光发光仪检测各孔的相对发光单位；

(6)分别将测定四种肿瘤标志物的低值、高值质控品进行定标，根据定标所得浓度值对待测样品定量。