[发明专利]咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法

说明书

本发明涉及一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其包括如下步骤：确定采用LC‑MS/MS检测分析参数条件，利用18种外标标准品以及9种内标标准品建立标准曲线；将血浆样品预处理，制备供试品溶液，上机测试，根据各标准曲线换算出血浆样品中各成分的含量。该咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法能够准确定量血浆样品种18种成分的含量，快速灵敏，可靠性好，便于进行代谢通路分析。

技术领域

本发明涉及检测分析技术领域，尤其涉及一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法。

背景技术

咖啡因是一种从植物样本中提取出的生物碱。适度使用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经的作用，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。自从人们认识到咖啡因的用途以来，咖啡因就被人为添加到多种食品和药物中。但是，大剂量或长期食用咖啡因也会对人体造成损害，特别是其具有成瘾性。

由于咖啡因与人类健康息息相关，经吸收后能完全地进入全身组织并且自由通过血-脑、胎盘、血-睾屏障，其在人体代谢系统的研究也日益深入。因此，对于与咖啡因代谢相关的多种物质进行准确定量十分必要。

但是，常规检测分析仅能够实现对与咖啡因代谢相关的单种成分或者少数几种成分的定量分析，工作量大，效率低。

发明内容

基于此，有必要提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，能够适用于血浆样本分析，实现快速高效定量分析咖啡因及其相关代谢物，可靠性好，还便于快速进行咖啡因代谢通路分析。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，包括如下步骤：

确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件，色谱条件包括：柱温38℃～42℃，流动相A为0.03％～0.05％乙酸的水，流动相B为0.03％～0.05％乙酸的乙腈，采用梯度洗脱方式；质谱条件包括：采用ESI离子源，采用MRM扫描模式；

按照所述参数条件，利用外标标准品以及内标标准品13C3-咖啡因、IS-7-甲基黄嘌呤、13C5-腺苷酸、d3-1-甲基黄嘌呤、d3-副黄嘌呤、d6-可可碱、d3-1,7-二甲基尿酸、d3-1-甲基尿酸、13C5-黄嘌呤核苷，建立1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤的标准曲线；

制备供试品溶液，按照所述参数条件上机测试，根据各标准曲线换算出血浆样品中咖啡因及其代谢物的成分含量。

在其中一个实施例中，所述色谱柱为ACQUITYHSS T3柱，进样量2μL。

优选地，采用流速为0.32mL/min～0.38mL/min，所述梯度洗脱的条件为：

0min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

0.5min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

5min，流动相A与流动相B的体积比为60:40；

5.1min，流动相A与流动相B的体积比5:95；

7.5min，流动相A与流动相B的体积比为5:95；

7.6min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

10min，流动相A与流动相B的体积比为95:5。

在其中一个实施例中，所述MRM扫描参数包括：

1-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/110、167.1/136.02，d3-1-甲基黄嘌呤的离子对为170/110；