[发明专利]咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法

权利要求书

1.一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件，色谱条件包括：色谱柱为ACQUITY HSS T3柱，柱温38℃～42℃，流动相A为含0.03％～0.05％乙酸的水，流动相B为含0.03％～0.05％乙酸的乙腈，采用梯度洗脱方式；质谱条件包括：采用ESI离子源，采用MRM扫描模式；

所述梯度洗脱采用的流速为0.32mL/min～0.38mL/min，所述梯度洗脱的条件为：

0min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

0.5min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

5min，流动相A与流动相B的体积比为60:40；

5.1min，流动相A与流动相B的体积比5:95；

7.5min，流动相A与流动相B的体积比为5:95；

7.6min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

10min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

按照所述参数条件，利用外标标准品以及内标标准品13C3-咖啡因、2,4,5,6-13C4-1,3,9-15N3-7-甲基黄嘌呤、13C5-腺苷酸、d3-1-甲基黄嘌呤、d3-副黄嘌呤、d6-可可碱、d3-1,7-二甲基尿酸、d3-1-甲基尿酸、13C5-黄嘌呤核苷，建立1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤的标准曲线；

制备供试品溶液，按照所述参数条件上机测试，根据各标准曲线换算出血浆样品中咖啡因及其代谢物的成分含量。

2.根据权利要求1所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，进样量2μL。

3.根据权利要求1所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述MRM扫描参数包括：

1-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/110、167.1/136.02，d3-1-甲基黄嘌呤的离子对为170/110；

3-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/124、167.1/33；

鸟苷酸的离子对为364/152、364.2/323.2；

7-甲基黄嘌呤的离子对为167/124、167/150，IS-7-甲基黄嘌呤的离子对为173.1/127.9；

腺苷酸的离子对为268.097/136、268.097/212.09，13C5-腺苷酸的离子对为273/136.1；

咖啡因的离子对为195.08/138.06、195.08/83，13C3-咖啡因的离子对为198.1/140；

副黄嘌呤的离子对为181.1/55.1、181.2/124.2，d3-副黄嘌呤的离子对为184.1/124.1；

可可碱的离子对为181/138、181/89.07，d6-可可碱的离子对为187/169；

茶碱的离子对为181.1/137.1、181.1/124.1；

1,3,7-三甲基尿酸的离子对为209.2/137、209.2/165，

1,7-二甲基尿酸的离子对为195/180、195/137，d3-1,7-二甲基尿酸的离子对为198.1/183；

1-甲基尿酸的离子对为181/138、181/86，d3-1-甲基尿酸的离子对为184.1/141；

3,7-二甲基尿酸的离子对为195/180、195/152.04；

一磷酸腺苷的离子对为346/134、346/97；

肌苷的离子对为267.1/135、267.1/108；

尿酸的离子对为166.8/96.1、167.1/124.1；

黄嘌呤核苷的离子对为283.076/151、283.076/108，13C5-黄嘌呤核苷的离子对为288/151；

以及黄嘌呤的离子对为151/108、151/80。