[发明专利]UPLC-MS/MS法测定海洛因成瘾大鼠和小鼠体内代谢物在体内的分布及其应用

说明书

本发明公开了UPLC‑MS/MS法测定海洛因成瘾大鼠和小鼠体内代谢物在体内的分布及其应用。本发明有益效果在于，该方法选择性强，灵敏度高，通过大鼠和小鼠两种动物模型中海洛因特征代谢产物含量器官分布的相互验证，可为生物样品中海洛因及海洛因主要代谢物的含量测定和组织分布情况提供数据参考，为评估毒品使用及药物滥用提供了分析手段。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及UPLC-MS/MS法测定海洛因成瘾大鼠和小鼠体内代谢物在体内的分布及其应用。

背景技术

在法医毒物分析中，检测海洛因的常规检材往往都是以尿液、血液为主，然而，在不同动物模型中研究不同器官是否可以作为海洛因检毒的常规检材的研究甚少。海洛因，俗称白粉，其在体内极易被吸收和代谢，在血中转化为O6-单乙酰吗啡的半衰期为3～9min，。然而，由于海洛因在体内极易被代谢，导致生物检材中往往无法直接检测海洛因的原型药物，所以只能通过检测并研究它的代谢物来判断是否吸食过海洛因。O6-单乙酰吗啡在血中转化为吗啡的半衰期也仅约为45min，很快进一步去乙酰化为吗啡，进而生成吗啡葡萄糖醛酸苷。而在肝和其它组织中，O6-单乙酰吗啡以较慢的速度转化为吗啡，约在几个小时内完全转化。由于O6-单乙酰吗啡仅来源于海洛因的代谢，所以它常常被作为检测是否滥用海洛因的有力证据。据文献查阅，均是用UPLC-MS/MS对单一大鼠或者小鼠体内海洛因及海洛因主要代谢物O6-单乙酰吗啡、吗啡、去甲吗啡的研究报道，但并无同时用大鼠和小鼠两者测定体内海洛因及海洛因代谢物分布情况的报道研究。本文以SD大鼠和C57BL/6J小鼠为实验对象，通过建立成瘾动物模型并取用心、肝、肺、脑、肾和血液检材，利用超高效液相色谱串联质谱检测并比较海洛因特征代谢产物O6-单乙酰吗啡、吗啡、去甲吗啡的含量，为法医毒物分析在海洛因实际案件中选择最适宜的分析方法和检材提供参考依据。

发明内容

鉴于现有技术的缺陷，本发明旨在于提供一种UPLC-MS/MS法测定海洛因成瘾大鼠和小鼠体内代谢物在体内的分布及其应用。通过本发明对体内分布情况的研究，证实了血液，脑组织，肝组织可以作为海洛因检毒的最佳检材，同时证明肺、肾也可作为海洛因检毒检材。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

UPLC-MS/MS法测定海洛因成瘾大鼠和小鼠体内代谢物在体内的分布，所述测定的方法包括：

S1分别精确称取海洛因、吗啡、去甲吗啡、O6-单乙酰吗啡标准品以甲醇溶解、定容，配制成质量浓度为1g/L的储备液，于4℃冰箱中保存；再分别吸取上述标准溶液1mL，准确定容至10mL，配制成质量浓度为100mg/L混合标准储备液；使用时用甲醇配制成质量浓度范围为2-200μg/L的混合标准工作液；

S2获得实验用的成年雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠 (150-200g)和C57BL/6J小鼠；

S2将实验动物随机分为两组；将盐酸海洛因溶解在0.9％NaCl 溶液中，给实验动物每天连续腹腔注射2次，每天逐量增加，连续 21天；

S3随着海洛因剂量的增加，实验动物产生了生理依赖，包括跳跃、牙齿抖动、扭动、湿狗样抖、上睑下垂、齿颤、异常姿势症状；

S4分别对步骤S3的实验动物采集心脏、脑、肾脏、肺、肝、血液等组织样本。样本采集后置于-80℃超低温冷冻储存箱保存被检；

S5取等体重的样本，充分研磨，加入500μl乙腈，涡旋混匀，振荡10min，4000r/min离心10min，用0.45μm滤膜过滤后待测；

S6通过超高效液相色谱-串联质谱对样本进行检测；

S7获得检测结果，得出海洛因代谢物的体内分布。