[发明专利]一种基于蛋白互作原理的编码线粒体磷转运蛋白基因的筛选方法

权利要求书

1.一种基于蛋白互作原理的编码线粒体磷转运蛋白基因的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)构建番茄cDNA文库，将得到的番茄cDNA文库与SlMPT3；1::PDHB1酵母表达载体共转化到酵母NMY51感受态细胞中，得到酵母转化体；

2)将所述步骤1)得到的酵母转化体在SD/-Leu/-Trp/-Ade/-His固体培养基上培养，得到菌斑，将所述菌斑在含有X-gal的SD/-Leu/-Trp/-Ade/-His固体培养基上培养，挑取蓝色菌斑，对所述蓝色菌斑进行PCR检测，得到SlGPI基因互作的基因序列，经酵母双杂交系统互作和双分子荧光互补验证分析，得到SlGPI基因与SlPHT3基因互作；

3)以所述步骤2)的SlGPI基因为诱饵，筛选冰叶日中花cDNA文库，经酵母双杂交系统互作和双分子荧光互补分析验证，获得与SlGPI基因互作的冰叶日中花线粒体转运蛋白基因。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤1)番茄cDNA文库中插入片段大于1kb的不少于50％。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤1)番茄cDNA文库与SlMPT3；1::PDHB1酵母表达载体的质量比为2:1。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤2)培养的时间为3～4d，所述培养的温度为30℃。

5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤2)SD/-Leu/-Trp/-Ade/-His固体培养基中X-gal的浓度为30g/mL。