[发明专利]一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：制备供试品溶液：称取明日叶样品制成供试品溶液，备用；

S2：制备对照品溶液：分别称取绿原酸对照品和木犀草苷对照品，分别制成绿原酸对照品溶液、木犀草苷对照品溶液和混合对照品溶液，备用；

S3：高效液相色谱分析：将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在高效液相色谱检测条件下进行分析，将得到的高效液相色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到明日叶的指纹图谱；所述高效液相色谱检测条件如下：采用ULtimate XB-C8色谱柱；以流动相A为甲醇，流动相B为0.1～0.3%甲酸为流动相进行梯度洗脱，柱温25～35℃，流速0.8～1.2mL/min，检测波长190～400nm，分析时间35min，进样量10μL，洗脱梯度程序：0～20min时，流动相A:流动相B＝5:95～40:60；20～40min，流动相A:流动相B＝40:60～48:52；40～45min，流动相A:流动相B＝48:52～5:95；

S4：测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，记录45min色谱图，以绿原酸为指纹图谱参照物，以绿原酸色谱峰为参照物峰，测定十批明日叶药材的指纹图谱，得到由其共有特征峰构成的明日叶药材的标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有特征峰有14个，其中5号峰为绿原酸。

2.根据权利要求1所述的一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤S1中供试品溶液的制备包括以下步骤：称取明日叶粉末0.5g，精密称定，置于锥形瓶中，加入30～60mL的75%～95%乙醇超声15～60min，过滤于5℃水浴挥干，残渣用甲醇溶解，定容到2mL的容量瓶，以离心速度13000rpm/min，离心10min，取上清液，即得供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤S2中对照品溶液的制备包括以下步骤：分别称取绿原酸对照品、木犀草苷对照品3mg，精密称定，分别加入甲醇溶解，定容至5mL的容量瓶，即分别得到绿原酸对照品溶液和木犀草苷对照品溶液；再分别精密吸取1300μL绿原酸对照品溶液和木犀草苷对照品溶液500μL，摇匀即得混合对照品溶液。

4.根据权利要求1-3任一所述的一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱柱为ULtimate XB-C8[4.6 mm×250 mm，5μm]色谱柱。

5.根据权利要求1-3任一所述的一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述流动相A为甲醇，流动相B为0.1%甲酸。

6.根据权利要求1-3任一所述的一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述柱温为25℃，流速为0.8mL/min。

7.根据权利要求1-3任一所述的一种明日叶高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述检测波长为270nm。