[发明专利]茶籽多肽及其酶解制备方法、抗氧化活性测定方法

权利要求书

1.一种茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，包括：

预处理步骤：对油茶籽粕进行脱脂处理后，在60℃的温度条件下进行烘干、粉碎，过60目筛后，获得油茶籽粕粉；

茶籽蛋白质提取步骤：取油茶籽粕粉加水调制成浆，加入酶制剂进行酶解处理后，用沸水灭酶5min，在8000rpm的转速条件下离心处理10min，再将上清液的pH调至等电点后再次离心处理，取沉淀物冷冻干燥，获得茶籽蛋白，并测定茶籽蛋白的含量；

茶籽多肽制备步骤：取茶籽蛋白用去离子水溶解，调节pH后加入蛋白酶于恒温下进行酶解处理，用沸水灭酶5min，在8000rpm的转速条件下离心处理10min，取上清液以获得茶籽多肽液；

茶籽多肽含量测定步骤：取5.0mL茶籽多肽液，加入5.0mL10％的三氯乙酸水溶液，混匀后静置10min，在4000rpm的转速条件下离心15min，去除其中的蛋白质及大分子长链肽段，再取6.0mL上清液，以Gly-Gly-Tyr-Arg为标准品，采用双缩脲法测定上清液中的茶籽多肽含量，并按照标准公式计算多肽得率。

2.根据权利要求1所述的茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，所述茶籽蛋白质提取步骤中酶制剂为总加酶量300U/g的α-淀粉酶：漆酶为3：2，且料液比为1:25g/mL、pH为5.0，酶解处理过程温度为35℃，酶解处理时长为60min。

3.根据权利要求1或2所述的茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，所述茶籽蛋白质提取步骤中测定茶籽蛋白的含量具体包括：

精确称取干燥的茶籽蛋白，用去离子水溶解后，转移至250mL容量瓶中，加水定容，采用考马斯亮蓝法，以牛血清蛋白为标品，以测定茶籽蛋白浓度。

4.根据权利要求1所述的茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，所述茶籽多肽含量测定步骤中标准公式为：多肽得率＝水解液中的茶籽多肽量/茶籽蛋白质量×100％。

5.根据权利要求1所述的茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，还包括单因素影响测定步骤，所述单因素影响测定步骤包括：蛋白酶筛选步骤、加酶量对比测定步骤、反应温度对比测定步骤、pH对比测定步骤、以及反应时长对比测定步骤。

6.根据权利要求5所述的茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，所述蛋白酶筛选步骤具体包括：按照所述茶籽多肽制备步骤中的操作方式依次以胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶作为蛋白酶在40℃的温度下进行酶解处理，并通过测定多肽得率以确定各蛋白酶的酶解处理效果；

所述加酶量对比测定步骤具体包括：以固定料液比1：25，在温度为60℃、pH为8.0的条件下，依次加入100U/g、300U/g、500U/g、900U/g的酶量，进行3h的酶解处理，并通过测定多肽得率以确定各加酶量的酶解处理效果；

所述反应温度对比测定步骤具体包括：以固定料液比1：25，在加酶量为700U/g、pH为8.0的条件下，依次在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃条件下进行3h的酶解处理，并通过测定多肽得率以确定各温度条件的酶解处理效果；

所述pH对比测定步骤具体包括：以固定料液比1：25，在加酶量为700U/g、温度为60℃的条件下，依次在pH为5、6、7、8、9、10的条件下进行3h的酶解处理，并通过测定多肽得率以确定各pH值的酶解处理效果；

所述反应时长对比测定步骤具体包括：以固定料液比1：25，在加酶量为700U/g、温度为60℃、pH为8.0的条件下进行连续6h的酶解处理，每间隔1h取样一次，并通过测定多肽得率以确定各反应时长下的酶解处理效果。

7.根据权利要求5或6所述的茶籽多肽的酶解制备方法，其特征在于，所述单因素影响测定步骤之后还包括四因素三水平响应面试验，所述四因素三水平响应面试验具体包括：以温度、反应时长、pH、总加酶量为条件变量进行响应面试验，并根据试验结果以多肽得率为响应值，构建条件变量与响应值之间的数学模型并进行方差分析。