[发明专利]能够特异性识别RBD蛋白的IgA抗体以及试剂盒

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种能够特异性识别RBD蛋白的IgA抗体以及试剂盒。该抗体可以作为SARS‑CoV‑2的RBD蛋白的IgA抗体的校准品应用。本发明还提供了包含该抗体的试剂盒，该试剂盒能够实现对新型冠状病毒肺炎IgA抗体的自动化、高通量、快速检测。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种能够特异性识别RBD蛋白的IgA抗体以及试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2，亦被称为2019-nCoV、HCoV-19)属于β属的冠状病毒，颗粒呈圆形或椭圆形直径60nm～140nm，基因特征与SARS具有明显的区别，且相比于SARS，具有更高的感染能力。基于流行病学调查，COVID-19的潜伏期为1～14天，多为3～7天，症状以发热、干咳、乏力为主，重症患者躲在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出现凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。因此，如何快速确诊疑似病例，以及如何有效监控疾病进程，将为治疗COVID-19，打好疫情攻坚战的重点。

据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中规定，目前确诊COVID-19的方法为使用实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性，或病毒基因测序，与已知的新型冠状病毒高度同源。但疫情发展至今，核酸检测试剂的漏检问题一再暴露，阳性检出率只有30％～50％，主要是由于采样方式局限性造成的。核酸检测，一般是通过收集鼻咽拭子、疑似患者的痰、血液、粪便，提取其中的RNA片段进行荧光RT-PCR，采样过程中，会混入大量人体细胞、细菌，进而造成待测RNA丰度低，检测系统无法检测，最终导致假阴性的产生。同时，除抽血外，其余采样方式，均会造成采样人员暴露于可能含有病原体的环境中，有潜在的感染风险。样品制备过程，需要步骤多、操作时间长，对检测人员的技术水平要求高。

在人体免疫应答中，IgA抗体略晚于IgM抗体出现，早于IgG抗体，是人体抗感染的主要早期抗体，检测阳性能够提示新近发生感染。根据前期对SARS的研究结果以及对新型冠状病毒最新的研究报道，病人在感染病毒后，会于3～7天左右会产生IgM抗体，随后会产生IgA抗体，1周后IgG抗体也会上升，临床上检测IgM抗体、IgA抗体和IgG抗体能够辅助诊断、监控病情及判断治疗效果。在检测IgM的同时，合并检测IgA，能够有效弥补IgM试剂可能存在的假阳性或漏检，提高诊断准确性，对缩短患者感染后检测的窗口期有重要的临床价值。

化学发光技术主要依据检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下成定量线性惯性的原理，利用专用的仪器对化学发光强度进行检测，从而确定待测物的含量，具有灵敏度高、报告速度快、自动化程度高等突出的优点，现已广泛应用于医学检验领域。根据反应原理，可将化学发光技术分为间接法、捕获法、竞争法和夹心法，其中，其中，间接法是将抗原包被于固相表面，根据抗原-抗体结合的免疫学原理，能够快速富集待测抗体，并通过合适的二抗，就能检测出待测抗体的含量。

新型冠状病毒基因编码多种结构蛋白，最为主要的是突刺蛋白(spikeglycoprotein,S)。S蛋白是可能最早被免疫系统识别的抗原。新型冠状病毒利用高度糖基化的同源三聚体S蛋白进入宿主细胞。S蛋白经历很多种结构重新排列后将病毒融合进入宿主细胞的细胞膜。这一过程包括病毒的S1亚基结合到宿主细胞受体上，引发三聚体不稳定性的发生，S蛋白中3个RBD中的1个会向上螺旋突出，导致S1亚基的脱落和S2的折叠，从而使S蛋白更容易与宿主受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合。三聚体的主要状态为三个受体结构域(RBD)之一向上旋转为受体可结合的构象。生物物理和结构证据表明，较之前的SARS冠状病毒，新型冠状病毒的三聚体更容易与细胞表面的ACE2蛋白结合。因此，RBD蛋白是作为新冠病毒早期诊断的最主要的蛋白位点。抗原的选择会直接影响新型冠状病毒IgA抗体检测试剂的性能。同时，由于可能存在的IgM抗体和IgG抗体与抗原的竞争性结合，会使测量IgA抗体的准确性和灵敏性有所下降，因此，如何解决这些问题，是准确测量新型冠状病毒IgA抗体所需要克服的主要问题。