[发明专利]一种用于合成戊二胺的赖氨酸脱羧酶及其应用

权利要求书

1.一种用于合成戊二胺的赖氨酸脱羧酶，其特征在于，所述赖氨酸脱羧酶具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一个：

(I)如SEQ ID NO.1～4任一项所示的氨基酸序列；

(II)与SEQ ID NO.1～4中任一项所示的氨基酸序列具有≥75％同源性的氨基酸序列；

(III)如SEQ ID NO.1～4任一项所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个氨基酸获得的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶，其特征在于，所述赖氨酸脱羧酶来源于迟缓爱德华氏菌、蜂房哈夫尼菌、耐碱芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、尸杆菌、伯克霍尔德氏菌、青紫色素杆菌、霍乱弧菌、毛链霉菌、反刍动物月形单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、邦戈沙门氏菌、沙雷氏菌属、博代氏杆菌属、霍乱弧菌、气单胞菌属或克雷伯氏菌属中的任意一种；

优选地，所述赖氨酸脱羧酶来源于迟缓爱德华氏菌、克雷伯氏菌属、气单胞菌属或邦戈沙门氏菌。

3.一种编码权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸具有(i)、(ii)或(iii)所示的核苷酸序列中的任意一个：

(i)编码权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列；

(ii)编码SEQ ID NO.1～4任一项所示的赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列；

(iii)如SEQ ID NO.5～8任一项所示的核苷酸序列。

4.一种用于合成戊二胺的基因表达载体，其特征在于，所述基因表达载体包括：编码如权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列或如权利要求3所述的核苷酸；

优选地，所述基因表达载体为pET质粒，优选为pETDuet质粒；

优选地，所述基因表达载体还包括编码赖氨酸戊二胺反向转运蛋白的核苷酸序列。

5.一种如权利要求4所述的基因表达载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

将编码如权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列或如权利要求3所述的核苷酸插入质粒的限制性酶切位点之间，得到所述基因表达载体。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括插入赖氨酸戊二胺反向转运蛋白基因的操作；

优选地，所述赖氨酸戊二胺反向转运蛋白基因前还包括信号肽；

优选地，所述信号肽包括大肠杆菌周质空间分泌信号肽；

优选地，所述信号肽包括dsbA、hlyA、lamB、malE、ompA、ompF、ompT、phoA或pelB中的任意一种，优选为pelB。

7.一种用于合成戊二胺的重组工程菌，其特征在于，包含如权利要求4所述的基因表达载体和/或编码权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶的核苷酸。

8.一种利用如权利要求7所述的重组工程菌制备戊二胺的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

将所述重组工程菌培养、诱导后的得到的菌液离心并重悬，得到菌悬液，所述菌悬液与含有赖氨酸盐酸盐和磷酸吡哆醛的缓冲液混合反应、离心后得到所述戊二胺。