[发明专利]一种鉴定黄纹大胡蜂的DNA条形码标准检测片段CO II及其应用

权利要求书

1.一种鉴定黄纹大胡蜂的DNA条形码标准检测片段CO II，其特征在于，所述DNA条形码标准检测片段COII的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种用于鉴定黄纹大胡蜂的引物对，其特征在于，所述引物对用于扩增权利要求1所述的DNA条形码标准检测片段CO II；所述引物对中，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.一种利用权利要求1所述的DNA条形码标准检测片段鉴定黄纹大胡蜂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的DNA，以待测样品的DNA作为模板DNA，使用权利要求2所述的引物对进行PCR扩增，得到COII基因片段；

(2)将得到的COII基因片段进行琼脂糖凝胶电泳分析，经溴化乙锭染色后于紫外灯下观察，根据扩增产物的大小判定结果，对特异性目的条带进行测序；

(3)将测序得到的结果经过校对、序列拼接后，除去引物序列，再与所述DNA条形码标准检测片段进行比对，若同源性在98％或以上，则可以判定待测样品为黄纹大胡蜂来源。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，PCR扩增时设置阴性对照和阳性对照，所述阳性对照为含有所述DNA条形码标准检测片段的PCR反应产物。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增程序为：

首先94℃预变性3.5分钟；然后94℃变性35秒，49℃退火35秒，72℃延伸45秒，共33个循环；最后72℃延伸5分钟，置4℃保存。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应体系为：

双蒸水19μL，PCR反应混合液25μL，2μL正向引物P1，2μL反向引物P2，2μL DNA模板；其中，正向与反向引物的浓度为10μmol/L，PCR反应混合液内含0.1U的Taq聚合酶、500μmol/L的脱氧核糖核苷三磷酸、20mmol/L的酸碱度pH＝8.3的三羟甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L的氯化钾、3mmol/L氯化镁。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括待鉴定的昆虫药材的鲜品或干品、炮制品或粉末状样品、全虫或部分虫体、蛹或幼虫或成虫。

8.一种权利要求1所述的DNA条形码标准检测片段CO II在黄纹大胡蜂物种鉴定及中药药材鉴定中的应用。