[发明专利]一种hIL-12p40-MSCs的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，具体包括步骤：

(1)分离培养鉴定hMSCs；

(2)克隆扩增hIL-12p40基因；

(3)构建重组hIL-12p40慢病毒表达载体；

(4)慢病毒的包装；

(5)hIL-12p40慢病毒感染MSCs；

(6)MSCs表达慢病毒介导的外源性hIL-12p40的鉴定。

2.根据权利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，所述的MSCs来源包括人脐带、脂肪、骨髓、羊水、胎盘。

3.根据权利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，所述的hIL-12p40基因具有SEQ NO 1(NM＿002187.2)所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，所述hIL-12基因的表达框架构成为：从5’-3’方向依次为EF-1α启动子、hIL-12p40编码基因。

5.根据权利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，步骤(3)中采用慢病毒载体将hIL-12p40基因导入MSCs，使hIL-12p40基因在MSCs稳定表达。

6.根据权利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，步骤(5)中慢病毒感染6代以内的对数生长期hMSCs。

7.根据权利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制备方法，其特征在于，步骤(5)中慢病毒感染hMSCs的MOI值范围为20-50。

8.根据权利要求1～7任一项所述制备方法制备得到的hIL-12p40-MSCs在制备抑制细胞免疫的药物中的应用。

9.根据权利要求1～7任一项所述制备方法制备得到的hIL-12p40-MSCs在制备治疗再生障碍性贫血、移植排斥反应及自身免疫性疾病等细胞免疫增强型疾病的药物中的应用。