[发明专利]一种荸荠品种鉴定专用引物及其荸荠品种鉴定方法

说明书

本发明公开了一种荸荠品种鉴定专用引物及其荸荠品种鉴定方法，属于品种鉴定领域，引物序列为AGAGAGAGAGAGAGAGYC。通过利用ISSR标志技术合成引物，对番禺地方种，桂蹄2号和桂蹄3号进行PCR扩增，重复性好，桂蹄3号与番禺地方种比，桂蹄3号约在730bp缺失，和桂蹄2号比，桂蹄3号约在250bp基因组存在，而桂蹄2号缺失。证明桂蹄3号与番禺荸荠地方种和桂蹄2号在ISSR标记技术显示存在明显差异，说明引物可以鉴别以上3个品种；操作简便快速，对样本处理简单，鉴定结果高度准确。

技术领域

本发明涉及品种鉴定领域，尤其涉及一种荸荠品种鉴定专用引物及其荸荠品种鉴定方法。

背景技术

荸荠俗称马蹄，可鲜食，亦可加工，营养丰富，是广西名特优农产品和重要的出口创汇产品之一，被列为我国农业重点发展的特色农产品。

目前，广西是我国荸荠第一大产区，种植面积占全国种植面积的50％以上。但受荸荠品种单一、种性退化、抗性及大果率低等因素的影响，产业化发展受较大限制。不能根据具体的品种进行设计出相应标准化栽培技术，无法确保良种良繁。

发明内容

本发明的目的在于提供一种荸荠品种鉴定专用引物及其荸荠品种鉴定方法，解决背景技术中提到的技术问题。

一种荸荠品种鉴定专用引物，所述引物序列为AGAGAGAGAGAGAGAGYC。

进一步地，所述荸荠品种包括番禺地方种、桂蹄2号和桂蹄3号。

一种荸荠品种鉴定专用引物的荸荠品种鉴定方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1：建立PCR的ISSR扩增体系和ISSR反应程序；

步骤2：对待测的荸荠品种进行DNA提取，荸荠品种包括番禺地方种、桂蹄2号和桂蹄3号；

步骤3：使用步骤1中的专用引物对提取的DNA为模板，进行PCR扩增；

步骤4：配制含有0.01％核酸凝胶荧光染料GelRed(10000x)的1.5％琼脂糖凝胶，取PCR扩增产物于1×TBE缓冲液中电泳，待溴酚兰迁移至琼脂糖凝胶的2/3处，取出胶，而后清水漂洗，放在自动凝胶成像仪中观察、拍照记录。

进一步地，所述步骤1中20.0μl的ISSR扩增体系包括14.7μl ddH₂O、2.0μl10×ExTaq buffer、1.6μl dNTP、0.5μl Primer、0.2μl Ex Taq DNA polymerase和1.0μl GenomicDNA。

进一步地，所述dNTP为2.5mmol/L，所述Primer为10μmol/L，所述Ex Taq DNApolymerase为5U/μl，所述Genomic DNA为80ng/μl。

进一步地，所述步骤1中ISSR反应程序包括预变性94℃4min；40个循环，94℃30sec；40个循环，50-54℃40sec；40个循环，72℃90sec；72℃7min；最终4℃保存。

进一步地，所述步骤4中取7μl扩增产物于1×TBE缓冲液中电泳，电泳的电压为5v/cm。

本发明采用了上述技术方案，本发明具有以下技术效果：

本发明通过利用ISSR标记技术合成了一个引物(AGAGAGAGAGAGAGAGYC)，对番禺地方种，桂蹄2号和桂蹄3号进行PCR扩增，重复性好，桂蹄3号与番禺地方种比，桂蹄3号约在730bp缺失，和桂蹄2号比，桂蹄3号约在250bp基因组存在，而桂蹄2号缺失。证明桂蹄3号与番禺荸荠地方种和桂蹄2号在ISSR标记技术显示存在明显差异，说明引物(AGAGAGAGAGAGAGAGYC)可以鉴别以上3个品种；操作简便快速，对样本处理简单，鉴定结果高度准确。

附图说明