[发明专利]一种荸荠品种鉴定专用引物及其荸荠品种鉴定方法有效
| 申请号： | 202010630352.0 | 申请日： | 2020-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN111549174B | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | 江文;高美萍;黄诚梅;陈丽娟;蔡炳华 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京卓岚智财知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11624 | 代理人： | 任漱晨 |
| 地址： | 530000 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 荸荠 品种 鉴定 专用 引物 及其 方法 | ||
1.一种荸荠品种鉴定专用引物的荸荠品种鉴定方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
步骤1：建立PCR的ISSR扩增体系和ISSR反应程序；
步骤2：对待测的荸荠品种进行DNA提取，荸荠品种包括番禺地方种、桂蹄2号和桂蹄3号；
步骤3：使用荸荠品种鉴定专用引物以提取的DNA为模板，进行PCR扩增，
所述引物序列为AGAGAGAGAGAGAGAGYC；
步骤4：配制含有0.01％核酸凝胶荧光染料GelRed的1.5％琼脂糖凝胶，取PCR扩增产物于1×TBE缓冲液中电泳，待溴酚兰迁移至琼脂糖凝胶的2/3处，取出胶，而后清水漂洗，放在自动凝胶成像仪中观察、拍照记录。
2.根据权利要求1所述的一种荸荠品种鉴定专用引物的荸荠品种鉴定方法，其特征在于：所述步骤1中20.0μl的ISSR扩增体系包括14.7μl ddH2O、2.0μl10×Ex Taq buffer、1.6μl dNTP、0.5μl权利要求1所述的专用引物、0.2μl Ex Taq DNA polymerase和1.0μlGenomic DNA。
3.根据权利要求2所述的一种荸荠品种鉴定专用引物的荸荠品种鉴定方法，其特征在于：所述dNTP为2.5mmol/L，所述权利要求1所述的专用引物为10μmol/L，所述Ex Taq DNApolymerase为5U/μl，所述Genomic DNA为80ng/μl。
4.根据权利要求3所述的一种荸荠品种鉴定专用引物的荸荠品种鉴定方法，其特征在于：所述步骤1中ISSR反应程序包括预变性94℃4min；40个循环，94℃30sec，50-54℃40sec，72℃90sec；72℃7min；最终4℃保存。
5.根据权利要求4所述的一种荸荠品种鉴定专用引物的荸荠品种鉴定方法，其特征在于：所述步骤4中取7μl扩增产物于1×TBE缓冲液中电泳，电泳的电压为5v/cm。
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