[发明专利]一种靶向病毒的特异性miRNA的获得方法

说明书

本发明公开了一种靶向病毒的特异性miRNA的获得方法，该方法包括从NK细胞分泌的外泌体中获得具有靶向能力和结合位点的miRNA，再进行碱基替换以使其与病毒基因组序列的部分区域完全匹配，从而获得靶向病毒的特异性miRNA。通过该方法获得的特异性miRNA与病毒的基因组序列的部分区域完全匹配，其亲和力强，因此具有有效的抗病毒能力；而且与aNK外泌体中内容物具有极高的相似性，安全可控。

技术领域

本发明涉及一种靶向病毒的特异性miRNA的获得方法。

背景技术

MicroRNA(miRNA)是真核生物中存在的一类20个核苷酸长度左右的内源性非编码RNA，可以与mRNA结合从而调控基因的表达。目前,在人类基因组中已知的miRNA有2000种,miRNA几乎在所有生物途径中都发挥着重要作用，其表达谱的变化与许多人类疾病相关。miRNA通过抑制翻译和诱导mRNA降解来抑制基因的表达,在病毒的复制或抑制过程中也是如此。

病毒是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸(DNA或RNA)，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒依赖宿主细胞而存活，其感染复制周期大致包括：吸附、穿入、脱壳、生物合成(病毒核酸复制；病毒蛋白质合成)、装配与释放。根据病毒核酸类型的不同，动物病毒可以分为三大类：DNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒、RNA病毒。其中，DNA病毒包括腺病毒、疱疹病毒、痘病毒、肝炎病毒等，DNA和RNA逆转录病毒包括肉瘤病毒和艾滋病毒等，RNA病毒包括SARS冠状病毒、埃博拉病毒、流感病毒等。

目前针对病毒性传染病的防治主要以抗病毒抑制剂及特异性疫苗的研制与应用为主。然而，大多数病毒性疾病至今尚无特效抑制剂，而能够应用疫苗进行防治的病毒性疾病也很少。

目前抗RNA病毒都是基于病毒复制过程依赖宿主细胞的RNA聚合酶等机理而研发特异性的RNA聚合酶抑制剂(小分子化合物，瑞德西韦)，而此类抑制剂的研发周期长、失败率高，使得开发针对逆转录酶的特异性抑制剂难度很大，此外，COVID-19病毒的RNA可以直接指导蛋白质合成，RNA聚合酶抑制剂对此根本无效。

SARS-CoV-2作为全新发现的单股正链RNA病毒，依赖宿主细胞进行新病毒的合成。虽然目前COVID-19病毒基因组全测序已经完成，但是COVID-19病毒在宿主细胞内的复制和调控过程仍有待研究。冠状病毒的正链RNA进入宿主细胞后，可以直接作为mRNA链指导蛋白质的合成；也可以通过依赖RNA的RNA聚合酶(RDRP)作用，生成负链，再以负链为模板，在RDRP作用下，生成正链，达到复制的目的。同时，生成的正链也可作为mRNA指导蛋白质的合成。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向病毒的特异性miRNA的获得方法，通过该方法获得的特异性miRNA与病毒的基因组序列的部分区域完全匹配，其亲和力强，因此具有有效的抗病毒能力。

本发明的另一个目的在于提供一种靶向病毒的特异性miRNA的获得方法，通过该方法获得的特异性miRNA与激活的NK细胞(以下简称aNK)分泌的外泌体(以下简称aNK外泌体)中获得miRNA具有极高的相似性。外泌体是一类由细胞分泌的携带胞质组分的纳米级别的膜性小泡，机体各种各样的细胞都能分泌这类膜性小泡，其广泛分布于唾液、血浆、乳汁等体液中。外泌体中含有蛋白质、mRNA和miRNA等多种生物活性物质，通过膜融合的方式将内容物如miRNA和蛋白质传递给其他细胞，作为细胞之间相互交流的桥梁。因此，与aNK外泌体内容物有极高相似性的特异性miRNA安全可控。

具体的，该方法至少包括：

(1)从激活的NK细胞分泌的外泌体中获得miRNA；

(2)将步骤1获得的miRNA序列和病毒基因组序列进行比对，筛选出具有靶向能力和结合位点的miRNA；