[发明专利]一种申嗪霉素发酵工艺

说明书

本发明涉及微生物发酵领域，特别是涉及一种申嗪霉素发酵工艺，所述发酵工艺包括：向M18菌体发酵体系中补加碳源和/或氮源。所述碳源选自糖类、油脂、有机酸、有机酸酯或小分子醇。所述氮源选自无机氮源或有机氮源。所述无机氮源选自铵盐，所述铵盐优选为硫酸铵或硝酸铵，所述有机氮源选自复合氨基酸粉或酰胺。本发明的申嗪霉素发酵工艺维持菌体的连续生长和产物形成的需要，延缓菌体的衰老，将申嗪霉素大罐发酵周期延长至65小时左右；延长发酵产物PCA的合成与分泌周期，在延长期发酵产物PCA的含量仍继续大幅增长，最高含量可达9.7g/L以上；大大提高了发酵产量，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，特别是涉及一种申嗪霉素发酵工艺。

背景技术

申嗪霉素是一种吩嗪类农用广谱杀菌剂，化学名称为吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid，简称PCA)，是利用促生拮抗菌M18于发酵罐中深层培养再经提取纯化而得。该菌类属荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)，已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC NO.0462，在中国专利CN00119857.2中，发明人许煜泉、冯镇泰描述了生物农药促生拮抗菌M18及其制备方法，该专利被参考并结合于本文中。

目前利用M18菌工业化生产PCA的整个发酵过程中，发酵前25小时左右为菌体生长繁殖阶段，大约75％的营养成分C(还原糖)、N(氨基氮)被消耗，随后进入产物PCA的生物合成阶段，发酵约40小时之后，营养成分C基本消耗完毕，菌体生长受到影响，开始衰老自溶，释放出胞内氨基氮和产物分解酶导致产物PCA的含量开始下降，发酵结束，发酵液中产物PCA含量为4.5g/L左右。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种申嗪霉素发酵工艺，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种申嗪霉素发酵工艺，所述发酵工艺包括：向M18菌体发酵体系中补加碳源和/或氮源。

优选的，所述M18发酵体系选自以下方式获得：

1)将M18菌体种子菌液接种至发酵摇瓶中获得；

2)将M18菌体种子菌液接入种子罐中培养，待菌体浓度OD600达2.0以上时移种至大罐中发酵获得。

优选的，所述碳源选自糖类、油脂、有机酸或有机酸酯。

优选的，糖类选自单糖或多糖，所述单糖优选为葡萄糖，所述多糖优选为蔗糖。

优选的，所述氮源选自无机氮源或有机氮源。

优选的，所述无机氮源选自铵盐，所述铵盐优选为硫酸铵或硝酸铵，所述有机氮源选自复合氨基酸粉或酰胺。

优选的，补加的碳源或氮源为各自的水溶液。

优选的，当发酵体系内还原糖的含量或氨基氮的含量为起始质量浓度的70％～75％时，补加入碳源或氮源。

优选的，以发酵容器的培养基装量体积为基数计量，补加的碳源总量为0.2％～1.0％，和/或，补加的氮源总量为0.2％～0.8％。

优选的，补加碳源/或氮源的方式选自分次补加或持续补加。

如上所述，本发明的申嗪霉素发酵工艺，具有以下有益效果：

1)维持菌体的连续生长和产物形成的需要，延缓菌体的衰老，将申嗪霉素大罐发酵周期延长至65小时左右；

2)延长发酵产物PCA的合成与分泌周期，在延长期发酵产物PCA的含量仍继续大幅增长，最高含量可达9.7g/L以上；

3)大大提高了发酵产量，降低了生产成本。

附图说明