[发明专利]一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒在审
| 申请号： | 202010619218.0 | 申请日： | 2020-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN111763768A | 公开（公告）日： | 2020-10-13 |
| 发明（设计）人： | 聂志超;张慧;李西清;张鸿 | 申请（专利权）人： | 安徽微分基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司： | 安徽申策知识产权代理事务所(普通合伙) 34178 | 代理人： | 程艳梅 |
| 地址： | 238000 安徽省巢湖市巢湖经济开*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 covid 19 快速 检测 显色 指示 试剂盒 | ||
1.一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述指示试剂盒包含检测显色指示剂、检测反应液、阳性对照品、阴性对照品和LAMP引物组。
2.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述检测显色指示剂包含0.5～2.3mM dNTPs、2～12mM MgSO4、10～25mM Tris-HCl、5～15mM KCl、8～16mM(NH4)SO4、0.1～0.3％Triton X-100、0.5～1.5M甜菜碱和酸碱指示剂。
3.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述检测反应液包含6～10U Bst DNA聚合酶、16～25U ThermoStable V反转录酶、DNAPolymerase、20U AMV反转录酶、6～10U RNase抑制剂、18～26％海藻糖。
4.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品为COVID-19特异性基因N对应的人工合成质粒。
5.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述阴性对照品为非COVID-19特异性基因N对应的人工合成质粒。
6.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述LAMP引物组包含COVID-19病毒的特异性基因N对应LAMP引物组，0.1～0.3μM引物组F3/B3、0.8～3.2μM引物组FIP/BIP、0.2～0.6μM引物组LoopF/LoopR。
7.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述LAMP引物组由外引物组F3/B3、内引物组FIP/BIP以及环引物组LoopF/LoopR组成，
F3序列为：5’-GCTGCTGAGGCTTCTAAG-3’；
B3序列为：5’-GCGTCAATATGCTTATTCAGC-3’；
FIP序列为：5’-GCGGCCAATGTTTGTAATCAGTAGACGTGGTCCAGAACAA-3’；
BIP序列为：5’-TCAGCGTTCTTCGGAATGTCGCTGTGTAGGTCAACCACG-3’；
LoopF序列为：5’-CCTTGTCTGATTAGTTCCTGGT-3’；
LoopR序列为：5’-CAGCGCTTCAGCGTTCTTCG-3’。
8.根据权利要求1所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的使用方法包括如下步骤：
S1、将试剂解冻，分别将检测显色指示剂、检测反应液和LAMP引物组按照一定的比例配置混合均匀。
S2、分别将待检测核酸样品，阳性对照品和阴性对照品按照一定比例加入S1配置好的的混合溶液中，混匀离心。
S3、将反应置于65℃孵育30分钟。
S4、反应结束后在自然光充足的环境中进行观察，可肉眼直接判读结果。
9.根据权利要求8所述的一种COVID-19快速检测显色指示试剂盒，其特征在于：所述步骤S3中，孵育过程用到的温控设备，65℃的恒温孵育仪、热循环仪、水浴锅等均可以。
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