[发明专利]使用CRISPR-Cas9系统对间充质干细胞进行CKIP-1基因敲除的方法在审
| 申请号： | 202010613315.9 | 申请日： | 2020-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN111733160A | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 王兴;杨旭源;张新慧 | 申请（专利权）人： | 沈阳万类生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N5/10 |
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| 地址： | 110024 辽宁省沈*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 使用 crispr cas9 系统 间充质 干细胞 进行 ckip 基因 方法 | ||
1.一种CRISPR-Cas9靶向敲除CKIP-1基因及其特异性的sgRNA，其特征在于，首先设计获得特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA；其次构建CKIP-1基因的sgRNA到表达载体系统，然后将此载体系统转染间充质干细胞，得到CKIP-1基因敲除细胞株。
2.根据权利要求1所述的特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA，其DNA序列如SEQID NO：7和SEQ ID NO：8所示，所述sgRNA在CKIP-1基因上的靶序列是唯一的。
3.根据权利要求2所述的特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA，其引物包括针对CKIP-1基因第6外显子上的引物对：
CKIP-1.F：如SEQ ID NO：1所示；
CKIP-1.R：如SEQ ID NO：2所示。
4.根据权利要求1所述的构建CKIP-1基因的sgRNA到表达载体系统，是一种靶向敲除CKIP-1基因的CRISPR-Cas9重组表达载体pSpCas9(BB)-2A-GFP(PX458)，其特征在于：含有特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA和Cas9蛋白的重组表达载体。
5.权利要求4所述的系统，其特征在于：可以导入到基因编辑细胞中，筛选得到阳性细胞。
6.权利要求4的系统在制备用于间充质干细胞基因编辑的试剂中的用途。
7.权利要求6所述的用途，其中间充质干细胞为人骨髓间充质干细胞(hMSCs)CP-H166。
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