[发明专利]一种siRNA递送系统复合物及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及基因治疗及纳米靶向递送技术领域，具体涉及一种siRNA递送系统复合物及其制备方法和用途。制备全过程为：先由Boc保护的组氨酸与胆固醇反应生成Boc保护的组氨酸胆固醇基酯，后在三氟乙酸中脱BOC释放保护的氨基生成组氨酸胆固醇基酯，后由氨基与羧甲基壳聚糖的羧基反应修饰到长链羧甲基壳聚糖生成组氨酸胆固醇基酯修饰的羧甲基壳聚糖，对组氨酸胆固醇基酯修饰的羧甲基壳聚糖进行靶向标记生成组氨酸胆固醇基酯与靶向标记物共同修饰的羧甲基壳聚糖高分子化合物，然后在临界胶束浓度以上通过自组装形成稳定的球状递送载体，与siRNA混合，制得siRNA递送系统复合物，其具有较好的靶向性，环境响应性，siRNA稳定性。

技术领域

本发明涉及基因治疗及纳米靶向递送技术领域，具体涉及一种siRNA递送系统复合物及其制备方法和用途。

背景技术

RNA干扰(RNA interference)是生物进化过程中遗留下来的一种在转录后通过siRNA调控基因表达的机制。RNA干扰之所以能引起生物医学界几乎所有研究领域的广泛关注，不仅是因为理论上说人类细胞中任何基因基本上都能被siRNA沉默，更是因为siRNA具有强大的抑制基因表达的效应和高度的序列特异性。siRNA强大的沉默效应表现在与反义寡核苷酸和核酶等抑制基因表达的传统工具相比较,具有高达数十到数千倍基因沉默效率。siRNA高度的序列特异性表现在与目基因mRNA相差一个碱基序列的siRNA的基因沉默效应将大大受到削弱，从而保证了抑制目标基因的高度特异性。因此，siRNA作为一种极具前景的基因靶向药物，可广泛地用于诸如癌症等基因性疾病的治疗。然而，由于siRNA较低的稳定性与较差的药代动力学以及体内的各种生物屏障等原因，siRNA具有较差的体内治疗效果。因此，如何保持siRNA递送过程的稳定性、目标组织有效治疗剂量的积累以及细胞的高效内化，依然是限制siRNA临床转化及大规模应用的主要问题。

生物体内，尤其人的体内，任何一级生物屏障对于药物的治疗效果具有重要的影响作用。注射的药物经过各级屏障的清除及截留后最终到达作用部位及进入特定细胞的药物只有注射计量的0.7％左右。这一方面解释了药物治疗特别是对肿瘤进行化疗的毒副作用较大，身体免疫反应性较强，而治疗效果却较差的原因另一方面也说明即使研究者们对各种纳米载体进行具有多功能的设计，但是由于不能同时满足克服每一级的体内生物障碍，致使不能达到最终的较好的治疗效果因此，需要在深入理解体内各种疾病状态下各级生物屏障的演变机制的前提下，重新优化各种设计赋予纳米药物载体肿瘤靶向性以及其他的能力从而克服体内各级屏障，实现高效的肿瘤靶向递送。

研究表明，虽然表面带正电荷的纳米载体对表面带有一定的负电荷的细胞具有较好的黏附作用进而促进细胞的摄取，然而在体内血液循环系统中，表面具有正电荷的纳米载体复合物易与各种调理蛋白结合，后被单核巨噬系统通过肝脏和脾脏快速的清除。因此，通过改变纳米载体表面电荷来达到减少单核巨噬系统的清除，延长体内循环时间，增加细胞黏附摄取率以及提高溶酶体逃逸能力的目的若要提高在纳米载体递送过程中到达肿瘤的部位的效率，必须克服这种各级生物屏障之间的矛盾。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种siRNA递送系统复合物的制备方法，包括如下步骤：

S1、将胆固醇与Boc保护的组氨酸加入到二氯甲烷中，继续向二氯甲烷中加入二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，室温反应14-16h，依次将白色析出物过滤掉、减压下除去溶剂、纯化，得到Boc保护的组氨酸胆固醇基酯中间体；

S2、将S1制得的Boc保护的组氨酸胆固醇基酯中间体溶于二氯甲烷，继续加入三氟乙酸，搅拌1-1.5h，然后用质量分数为36.6％的氨水溶液中和，减压蒸发溶剂，将残余物在乙酸乙酯中稀释，依次洗涤、干燥，再次减压蒸发溶剂得到白色粉末状的组氨酸胆固醇基酯中间体；