[发明专利]一种快速对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法

权利要求书

1.一种对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法，包括：

1）将原料冷冻磨碎后，使用提取剂a提取，得到提取液a；离心，收集上清液，氮气吹干，再加入提取剂b重新溶解，过滤，收集滤液，得到提取液b；

所述步骤1）所述冷冻步骤中，冷冻方式为液氮冷冻；

所述提取步骤中，所述提取剂a为含内标的溶液；所述内标为芍药素3-葡萄糖苷；

所述提取剂a中，溶剂为由甲醇和甲酸组成的混合液；所述甲醇和甲酸的体积比为7-9：1；所述提取剂a中，内标的浓度为1-5 µg/mL；

所述提取剂b为由甲醇和甲酸组成的混合液；所述甲醇和甲酸的体积比为7-9：1；

所述过滤步骤中，滤膜孔径为0.22 µm；

所述原料为分开的番茄果皮和番茄果肉；

2）将所述提取液b用液相色谱和质谱联用进行花青素种类的解析；

所述步骤2）中，液相色谱检测的条件如下：

色谱柱类型：ACQUITY UPLC CSH C18；

色谱柱参数：2.1 mm × 100 mm i.d., 1.7 μm；

流动相A：由体积比为95:5的由乙腈和甲酸组成的混合液；

流动相B：由体积比为95:5的由水和甲酸组成的混合液；

梯度洗脱程序为：所述流动相A初始体积比例为2.5%，流动相A在5 min内从2.5%到10%，然后在15 min内从10%升到25%，保持5 min，然后在5 min内从25%变为2.5%；

流速：0.15 mL/min；

柱温：25°C；

自动进样器温度：20°C；

进样体积：1 μL；

所述步骤2）中，所述质谱检测的条件如下：

质谱为正离子模式；

离子源：ESI源；

毛细管电压：2.0 kV；

离子源温度：100°C；

脱溶剂气温度：300°C；

脱溶剂气流速：800 L/h；

锥孔气流：50 L/h：

质谱采集模式：Fast DDA模式；

分析模式：分辨率模式；

母离子采集范围：900 m/z-1000 m/z；

子离子采集范围：50 m/z-1000 m/z；

碰撞能量范围为6 V-80 V；

光谱条件：二极管阵列检测器波长范围为190 nm-800 nm；

所述步骤2）中，解析所得花青素的种类包括飞燕草素-3-（顺式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-（咖啡酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、飞燕草素-3-（反式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、飞燕草素-3-（阿魏酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-（顺式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-（反式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-（阿魏酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、锦葵素-3-（顺式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、锦葵素-3-（反式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、锦葵素-3-（阿魏酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-（反式-对香豆酸酰氧基-鼠李糖苷）-葡萄糖苷-5-葡萄糖苷和锦葵素-3-（对甲氧基-反式-对香豆酸酰氧基）-芸香糖苷-5-葡萄糖苷；

3）对所述提取液b所得不同种类花青素的含量进行定量分析，完成所述番茄果实中花青素的种类解析和含量测定。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述甲醇和甲酸的体积比为9:1；

所述提取剂a中，内标的浓度为3.75 µg/mL；

所述提取剂a与所述原料的用量比为0.2 - 0.8 g：1 - 4 mL；

所述提取步骤中，温度为-20℃至5℃；时间为10 - 14h；所述提取剂b中，所述甲醇和甲酸的体积比为9:1；所述提取剂b与所述上清液的体积比为：0.5 - 2；

所述离心步骤中，转速为2500 - 4500rpm；时间为18 - 22min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述提取步骤中，温度为4℃；时间为12 h；

所述离心步骤中，转速为3900 rpm；时间为20 min。