[发明专利]一种污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法

说明书

本发明公开了一种污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法，设置多个浓度梯度对秀丽线虫分别进行高通量的毒性暴露，通过设置多个平行组且对同一污染物毒性进行多次重复测定，进而获取多个浓度点毒性数据，拟合出目标污染物的剂量‑效应曲线。该方法主要包括以下步骤：配置秀丽线虫生长培养基；配置大肠杆菌OP50培养基；获取同步化后秀丽线虫原液；获取不同浓度梯度的环境污染物样液；进行秀丽线虫毒性暴露实验并获取毒性数据；对数据进行拟合。本发明可准确的计算出环境污染物对秀丽线虫神经毒性，为评价环境污染物对生态系统和人类健康的安全提供更科学的理论支撑。

技术领域

本发明涉及环境污染物毒性检测技术领域，尤其涉及一种污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法。

背景技术

随着工业化的迅速发展，越来越多化合物被开发出来，进而造成环境中出现各种各样的新型污染物，其中，有农药、重金属、抗生素和其它有机化合物等环境污染物造成的污染尤为突出。给环境及人类健康带来巨大的潜在风险。因此，越来越多的研究集中于环境污染物毒性的检测这一领域。

环境监测中通常采用理化分析和生物检测两类方法。其中理化分析是通过物理和化学等分析手段，快速灵敏的分析测定污染物的种类及浓度，其中，温度、溶解氧、pH值、电导率及氧化还原电位等一些常规参数可连续监测，理化分析具有快速、准确及可靠等特点，因而其在环境检测中具有很重要作用。有毒污染物的暴露水平及毒性程度决定了其在环境中的毒理作用，而理化分析方法可精确测定出化学物质、甚至是痕量的浓度以及待分析组分的精确含量，可为制定有毒化学品的相关标准及法规提供依据。

但是随着科技的不断发展，人类逐渐认识到理化分析方法虽然非常精确，但是也只能测出污染物中化合物的成分、数量，而不能直接评价污染物对生物体的危害性。当污染物进入环境后，可与环境中的其他物质共同存在，并发生复杂的作用，进而综合影响环境中的各种生物。而理化分析方法只能检出各种污染物成分的含量及类别，不能确切地评价生物所受到的综合影响。

生物监测方法是从生物学的角度出发，利用生物体对环境污染及环境变化所产生的种种反应，来对环境受污染程度及质量好坏进行直接表征，并提供环境质量监测及评价的依据。有毒污染物一旦进入环境中，将在各级生物学水平上对生态系统产生影响，进而使生态系统固有的结构及功能发生改变(李慧蓉.生物监测技术及其研究进展[J].江苏石油化工学院学报[J],2002,14(2):57-60.)。所以，生物检测方法是一种快速的监测分析方法，为一项综合性指标，其能反映出各有毒污染物对环境的综合毒性影响。应用生物监测方法检测评价有毒污染物已受到越来越多的关注。

秀丽线虫作为一种典型的受试生物体，已被证明对毒理学研究中的环境毒物敏感(Colmenares,D.,et al.,Delivery of dietary triglycerides to Caenorhabditiselegans using lipid nanoparticles:Nanoemulsion-based delivery systems.FoodChem[J].,2016.202:p.451-457.)。秀丽线虫是一种广泛分布的微小、自由爬行且全身通体透明的模式生物，主要以大肠杆菌为食，其新孵出的幼虫长0.25毫米，成虫长1毫米，易于培养(Barriere,A.andM.-A.Felix,Isolation of C.elegans and relatednematodes.WormBook:the online review of C.elegans biology,2014:p.1-19.)。秀丽线虫的生命周期短，在25℃条件下，从卵生长发育到能够产卵成虫，只需3天时间。同时，秀丽线虫寿命相对较短，野生型线虫在20℃条件下培养，在给予充足的食物和良好的环境下，其平均寿命仅为2-3周，这为我们进行相关的研究工作节省了大量的时间(张帅,miR-52通过抑制非经典Wnt信号通路VANG-1/Van Gogh延长秀丽隐杆线虫寿命的研究.2019,东北师范大学.)。