[发明专利]一种污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法

权利要求书

1.一种污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、通过秀丽线虫培养实验获取同龄段秀丽线虫原液；

S2、获取n(n≥2)个不同浓度的目标污染物，每个目标污染物的浓度为C_n＝C₀×F^n-1，C₀为目标污染物的浓度，F为稀释因子；

S3、通过毒性暴露实验获取n个不同浓度下的秀丽线虫头部平均摆动数Wn、对照组的秀丽线虫头部摆动数W₂；

S4、通过公式获取n个不同浓度对应的秀丽线虫头部摆动抑制率E_n，对En进行非线性拟合，获取“n个不同浓度-秀丽线虫头部摆动率”的剂量-效应曲线。

2.根据权利要求1所述的污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法，其特征在于，通过预实验获取使秀丽线虫头部摆动抑制率达到50％以上的最高抑制浓度C_H、抑制率低于10％以下的最低抑制浓度C_L，根据公式F＝(C_L/C_H)^1/(n-1)计算出稀释因子F。

3.根据权利要求1所述的污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法，其特征在于，所述秀丽线虫培养实验包括以下步骤：

S301、通过一级培养实验得到产卵期的秀丽线虫；

S302、将S301的产卵期的秀丽线虫通过二级培养实验得到同龄段秀丽线虫原液。

4.根据权利要求3所述的污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法，其特征在于，所述一级培养实验包括以下步骤：

S3011、制备秀丽线虫生长的固体培养基B_S，包括：将1mol/L的MgSO₄、1mol/L的CaCl₂、5mg/mL的胆固醇乙醇溶液各1mL与25mL的pH为6.0的K₂PO₄-KH₂PO₄混合配置成缓冲溶液；将琼脂粉、细菌学用蛋白胨、氯化钠溶于超纯水中，密封后进行高温杀菌18-22min，待冷却至60-70℃时加入所述缓冲溶液，混合均匀后在无菌环境中转移至灭菌后的培养皿中，得到固体培养基B_S，待固体培养基B_S冷却凝固后，冷藏保存；

S3012、制备OP50大肠杆菌的液体培养基B_L，包括：将胰蛋白胨、酵母浸出膏、氯化钠溶于超纯水中，混合均匀后用1mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至6.5-7.5，密封后进行高温杀菌18-22min，得到液体培养基B_L；

S3013、在无菌环境中将OP50大肠杆菌菌液注入液体培养基B_L，并将液体培养基B_L置于恒温震荡培养箱中培养22-26h后放入冷藏备用；所述恒温震荡培养箱的转速设置为150转/min；

S3014、吸取S3013培养后的OP50大肠杆菌菌液平铺于固体培养基B_S上，将固体培养基BS放入所述恒温震荡培养箱中培养22-26h后，得到含有OP50大肠杆菌的秀丽线虫生长培养基B_E；

S3015、将秀丽线虫转移至S3014获取的含有OP50大肠杆菌的秀丽线虫生长培养基B_E，将含有OP50大肠杆菌的秀丽线虫生长培养基B_E置于所述恒温培养箱中培养2-3天，得到产卵期的秀丽线虫。

5.根据权利要求4所述的污染物对秀丽线虫头部摆动抑制率的分析方法，其特征在于，

S3011中先将细菌学用蛋白胨、氯化钠溶于超纯水中，再加入琼脂粉；

S3012中将液体培养基B_L内的溶液分瓶密封后再进行高温杀菌18-22min。