[发明专利]一种氨基氮/粗蛋白的新型检测方法

说明书

本发明公开了一种氨基氮/粗蛋白的新型检测方法，属于检测技术领域，1、使用500～3000ml烧杯或大口径锥形瓶作为有机样本的消解容器；2、在低于300℃的加热环境下采用浓硫酸碳化有机样本，硫酸使用不限量，样本充分碳化后，加入适量蒸馏水，在低于100℃的温度下分次加入过氧化氢氧，至样本消解完全；3、使用50～1000ml的容量瓶以定容分取，加入酚酞指示剂，使用10%氢氧化钠外部酸碱中和滴定，调节目标显色液PH值；4、使用碘化汞钾对定量中和后的显色液进行显色，在420nm处进行分光光度测量，绘制工作曲线；5、计算氮元素质量分数，进而得出样本的粗蛋白含量。

技术领域

本发明涉及一种氨基氮/粗蛋白的新型检测方法，属于检测技术领域。

背景技术

1831年，法国化学家Jean Baptiste Dumas首创的一种定氮法-----杜马斯燃烧法，样本在燃烧管中燃烧，用二氧化碳排除燃烧管中的空气，蛋白质中的氮元素转化为氮气，并通过装有 KOH溶液的集气量筒中，通过测量集气筒中的氮气体积来确定粗蛋白含量。1964年，德国Heraeus公司生产出了世界上第一台Dumas法快速定氮仪（Rapid N）。1989年，随着Heraeus公司生产的世界上第一台可以检测克级样本的杜马斯法快速定氮仪Macro N的问世，拉开了杜马斯法在食品、饲料、肥料、植物、土壤及临床等领域上广泛应用的序幕。

1883年丹麦化学家Kjeldahl建立了凯氏定氮技术，现已发展为常量、微量及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的最常用方法。是在有催化剂的条件下，用焦硫酸盐消化样本将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样本中的氮量，由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，凯氏定氮技术为经典的蛋白质检验方法。

近些年多位学者用分光光度法替代了凯氏定氮技术中的测量部分的酸碱滴定环节，形成了蛋白质的分光光度测量法，得到了灵敏度高，检出限低的粗蛋白检测技术。

这些技术普遍应用于有机化工、食品、医药、畜牧等行业的科学研究、生产控制、质量检验中，但是现行技术由于样本密闭消解方式和检测流程、原理中的强热和蒸馏等易造成氮元素的损失，而存在检测过程中爆裂/爆炸的安全风险，检测结果重复性可以相差10%以上。

发明内容

为了克服上述技术上不足，本发明提供了一种氨基氮/粗蛋白的新型检测方法，该方法灵敏度高、检出限低、线性范围宽、重复性好、安全性高、适用范围广，技术检测下限达到0.002%水平，精密度优于1.5%。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种氨基氮/粗蛋白的新型检测方法：

1）、样本的准备：大颗粒固体样本粉碎至1～10毫米，使用500～3000ml烧杯或大口径锥形瓶作为有机样本的消解容器；

2）、样本的消解：

分别准确称取测样本三份于500mL烧杯A、B、C中，其中B、C瓶中样本质量相等，A瓶中样本量减半；秸秆使用3000ml烧杯，秸秆体积可以至2000ml；在C锥形瓶中定量加入铵标液500µg～1000µg；缓慢、分次向烧杯中加入20-100mL浓硫酸，秸秆可以将浓硫酸的使用量增大到500ml，剧烈反应后，盖上表面皿，将烧杯置于电热板并缓慢加热样本碳化完全或至出现硫酸烟；取下烧杯，稍冷后，加入30～100mL蒸馏水，分次加入30～100mL过氧化氢，低温缓慢加热，温度不超过300℃，中途适当补加过氧化氢，直至样本完全溶解、透明，加强热至刚好冒硫酸烟时取下，加水转移至250mL或1000ml容量瓶，定容摇匀（可以进行二次分取稀释）；

3）、试液移取与酸度调节：

对A、B、C三瓶试液分别独立移取平行分取两份10mL试液A1、A2，B1、B2，C1、C2于100mL容量瓶中；