[发明专利]一种乙型肝炎表面抗原检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种乙型肝炎表面抗原检测试剂盒，包括碱性磷酸酶标记F(ab')₂HBsAg羊多抗，磁微粒‑HBsAg抗体。本发明试剂盒中，抗体直接包被磁微粒具有更好的反应效率，有助于提高灵敏度；一些非特异性的结合是发生在抗体的FC端，而且切去后抗体Fab₂分子量会小些，也助于提高灵敏度。

技术领域

本发明属于免疫分析医学技术领域，尤其是涉及一种乙型肝炎表面抗原检测试剂盒。

背景技术

乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B Virus Surface Antigen，HBsAg)，是乙肝病毒的外壳蛋白。由226个氨基酸残基组成，相对分子质量24 000(糖基化形式27 000)。在HBV感染者血清中，以直径17～25nm的小圆形颗粒和长度不等的管状或丝状颗粒形式存在。

HBsAg不仅存在于血液中，还存在于许多体液和分泌物中，如唾液、乳汁、汗液、泪液、尿液、鼻咽分泌物、精液等。血清HBsAg仅为HBV感染的标志，不能反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。

酶联免疫吸附法(ELISA)因操作简单，无放射性污染，价格较低，被广泛应用，但其灵敏度较低。检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，检测结果的准确度和精密度较差。

PCR技术，DNA扩增的高效性导致了极微量的污染即可出现假阳性，因而使结果失真。此外病毒作为外原基因的入侵者，必须在阐明其全部或部分核苷酸序列时，才可以设计引物或探针，进行核酸分子杂交和PCR检测。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种灵敏度高、特异性好的乙型肝炎表面抗原检测试剂盒。

一种乙型肝炎表面抗原检测试剂盒，包括碱性磷酸酶标记F(ab')₂HBsAg羊多抗，磁微粒-HBsAg抗体。

优选的，碱性磷酸酶标记F(ab')₂HBsAg羊多抗的工作浓度为0.01～0.5μg/mL；磁微粒-HBsAg抗体的工作浓度为0.1-2mg/mL。

优选的，碱性磷酸酶标记F(ab')₂HBsAg羊多抗的制备包括如下步骤，

1)待标记原料F(ab')₂HBsAg羊多抗装入透析袋中，用0.02-0.05M的碳酸盐缓冲液，透析30min；

2)将标记原料F(ab')₂HBsAg羊多抗与活化的碱性磷酸酶按质量比1:(1-4)进行混合，之后用0.02-0.05M碳酸盐缓冲液于4℃透析16-24h，期间换液2-3次；

3)配制浓度为2-5mg/mL的NaBH₄水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例进行混合，并于4℃避光反应2h；

4)将上述步骤3)完成的标记液用0.01M PBS于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

优选的，活化的碱性磷酸酶的制备，包括如下步骤，

1)配制2-15mg/mL ALP溶液；

2)配制10-20mg/mL过碘酸钠NaIO₄溶液；

3)将上述1)和2)配制溶液按体积比1：1混匀，室温避光反应30min；

4)配制浓度为20-50μL/mL的乙二醇水溶液，与上述溶液3)以相同体积混合，常温避光反应30min，活化即完成，放-20℃保存。