[发明专利]用于检测母体血液中胎儿游离DNA β-地中海贫血突变的探针及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测母体血液中胎儿游离DNA β‑地中海贫血突变的探针及试剂盒；该试剂盒包括检测探针、捕获探针，还包括反应膜条、目的基因扩增试剂、清洗液、孵育液和显色液。该试剂盒利用了斑点杂交法，该方法使用了DNA杂交过程来检测产物，具有操作简单、快速简便、样品用量少、结果直观可靠等优点，可在无创产前诊断中广泛用于母体血浆中胎儿游离DNAβ‑地中海贫血突变的检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测母体血液中胎儿游离DNA β-地中海贫血突变的探针及试剂盒。

背景技术

1997年，研究发现在母体血浆中存在游离胎儿DNA(cffDNA)，这一发现为无创性产前诊断开辟了新的途径，尤其是在单基因遗传性疾病的诊断中，为预防出生缺陷cffDNA的检测至关重要。目前文献报道的cffDNA检测β-地中海贫血的突变主要对男性胚胎中Y染色体上的特异性基因，从而获得cffDNA在母体血浆中的含量，对女性胚胎的cffDNA进行检测，则通过分析胎儿和父母之间不同的核苷酸序列的遗传多态性来鉴别胎儿DNA，但由于实验程度复杂且实验条件要求高，难以应用于临床。

表观遗传学进展拓宽了通过母体血浆中存在的胎儿DNA诊断疾病的应用领域。2015年Lessard等通过胎儿和成人红系祖细胞DNA甲基化谱的比较，发现胎儿细胞的基因区与母体的该区域基因区存在甲基化差异，这种DNA甲基化差异的存在也使得从母体血浆中检测源自母系的胎儿等位基因成为现实，因此DNA甲基化作为一种潜在的检测胎儿表观遗传学标记物，越来越受到重视。

但将斑点杂交和DNA甲基化差异检测相结合用于确定胎儿出生缺陷暂未见文献报道。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种用于检测母体血液中胎儿游离DNA β-地中海贫血突变的探针及试剂盒，本发明通过设计针对胎儿DNA甲基化特异性序列(HBG2启动子区)的探针和突变型β-地中海贫血基因组探针，再通过斑点杂交检测cffDNA的β-地中海贫血突变位点，从而确定胎儿的出生缺陷，该试剂盒具有操作简单、快速简便，样品用量少，结果直观可靠的优势，采用该试剂盒可以在无创产前诊断中用于母体血浆中胎儿游离DNA β-地中海贫血突变的直接检测。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种用于检测母体血液中胎儿游离DNA β-地中海贫血突变的探针，包括检测探针和捕获探针；

检测探针的核苷酸序列为：

5'-AACCCATTCAGGTTGATGATTTGACCCCC-3'(SEQ ID NO：1)；

捕获探针的核苷酸序列为：

41-42N位点：5'-GAGGTTTTTTGAGTTT-3'(SEQ ID NO：2)；

41-42M位点：5'-GGTTGAGTTTTTTG-3'(SEQ ID NO：3)；

17N位点：5'-TGTGGGGTAAGGTG-3'(SEQ ID NO：4)；

17M位点：5'-TTTGGTTAGGTGAATG-3'(SEQ ID NO：5)；

654N位点：5'-GTTATTGTTTTAAT-3'(SEQ ID NO：6)；

654M位点：5'-GTTATTATTTTAATT-3'(SEQ ID NO：7)；

71-72N位点：5'-GGTGTTTTTAGTGAT-3'(SEQ ID NO：8)；

71-72M位点：5'-TTTAAGTGATGGTT-3'(SEQ ID NO：9)；