[发明专利]一种乙型肝炎表面抗体检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，包括磁微粒‑HBsAg重组抗原、以及碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原。本发明所述的试剂盒具有特异性好、灵敏度高等优点。

技术领域

本发明属于免疫分析医学技术领域，尤其是涉及一种乙型肝炎表面抗体检测试剂盒。

背景技术

乙型肝炎是一种严重的传染性疾病，具有广泛性，给人们的健康带来了严重的危害，它主要是通过母婴、血液及性接触传播，是较常见的传染病之一。

乙型肝炎病毒表面抗体(Antibody to Hepatitis B Surface Antigen，HBsAb，即抗-HBs)，是一种由乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B Virus Surface Antigen，HBsAg)诱导产生的特异性抗体。抗-HBs在血清中检出提示HBV感染后康复或接种乙肝疫苗后已有免疫力。急性乙型肝炎患者处于恢复期时，随着HBsAg的逐步消失，血清中出现抗-HBs，其为一种中和抗体，以HBsAg为疫苗免疫人体而产生，对HBV感染具有保护性免疫作用。

酶联免疫吸附法(ELISA)因操作简单，无放射性污染，价格较低，被广泛应用，但其灵敏度较低。检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，检测结果的准确度和精密度较差。

胶体金免疫层析技术(GICA)：20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种免疫学检测技术，快速方便，成本低廉，结果易于判读，但灵敏度过低。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种灵敏度高、特异性好的乙型肝炎表面抗体检测试剂盒。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，包括磁微粒-HBsAg重组抗原、以及碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原。

优选的，磁微粒-HBsAg重组抗原的工作浓度为0.1-2mg/mL、以及碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原的工作浓度为0.01-0.5μg/mL。

优选的，所述磁微粒-HBsAg重组抗原的制备包括如下步骤，取100mL0.1-0.5M羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液，加入60-100mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌40-60min，之后加入5-10mg HBsAg重组抗原，然后加入EDC，其浓度为5-10mg/mL，2-8℃反应1-1.5h后，用0.02-0.1mol/L Tris缓冲液洗涤3次，最后用0.02-0.1mol/L Tris缓冲液定溶至1L即可；优选的，磁微粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1-2μm。

优选的，碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原的制备包括如下步骤，

1)将待标记原料HBsAg重组抗原装入透析袋中，用0.02-0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液，透析30min；

2)将经步骤1)处理的待标记原料HBsAg重组抗原与活化的碱性磷酸酶按质量比1:(1-4)进行混合，之后用0.05M碳酸盐缓冲液于4℃透析16-24h，期间换液2-3次；

3)配制浓度为2-5mg/mL的NaBH₄水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例进行混合，并于4℃避光反应2h；

4)将上述步骤3)完成的标记液用0.01M PBS于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

优选的，活化的碱性磷酸酶的制备，包括如下步骤，

1)配制2-15mg/mL ALP溶液；

2)配制10-20mg/mL过碘酸钠NaIO₄溶液；