[发明专利]一种乙型肝炎表面抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，其特征在于：包括磁微粒-HBsAg重组抗原、以及碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原；

磁微粒-HBsAg重组抗原的工作浓度为0.1-2mg/mL、以及碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原的工作浓度为0.01-0.5μg/mL；

所述磁微粒-HBsAg重组抗原的制备包括如下步骤，取100mL0.1-0.5M羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液，加入60-100mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌40-60min，之后加入5-10mgHBsAg重组抗原，然后加入EDC，其浓度为5-10mg/mL，2-8℃反应1-1.5h后，用0.02-0.1mol/LTris缓冲液洗涤3次，最后用0.02-0.1mol/LTris缓冲液定溶至1L即可；

碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原的制备包括如下步骤，

1)将待标记原料HBsAg重组抗原装入透析袋中，用0.02-0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液，透析30min；

2)将经步骤1)处理的待标记原料HBsAg重组抗原与活化的碱性磷酸酶按质量比1:(1-4)进行混合，之后用0.05M碳酸盐缓冲液于4℃透析16-24h，期间换液2-3次；

3)配制浓度为2-5mg/mL的NaBH4水溶液，按1mg ALP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于4℃避光反应2h；

4)将上述步骤3)完成的标记液用0.01MPBS于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存；

磁微粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1-2μm；

活化的碱性磷酸酶的制备，包括如下步骤，

1)配制2-15mg/mLALP溶液；

2)配制10-20mg/mL过碘酸钠NaIO4溶液；

3)将上述1)和2)配制溶液按体积比1：1混匀，室温避光反应30min；

4)配制浓度为20-50μL/mL的乙二醇水溶液，与上述溶液3)以相同体积混合，常温避光反应30min，活化即完成，放-20℃保存。

2.根据权利要求1所述的乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，其特征在于：磁微粒-HBsAg重组抗原以及碱性磷酸酶标记HBsAg重组抗原中的HBsAg重组抗原均经过如下处理，

1)二硫苏糖醇(DTT)用超纯水溶解，配制成0.5mol/L浓储液；

2)HBsAg重组抗原中加入步骤1)配制的DTT浓储液，至DTT终浓度为10-20mmol/L，室温避光反应20min；

3)使用HBsAg重组抗原透析液透析HBsAg重组抗原2h。

3.根据权利要求2所述的乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，其特征在于：HBsAg重组抗原透析液的配制包括如下步骤，

1)在600mL纯化水中，加入5-10gTris；

2)再加入10-20g EDTA搅拌至完全溶解；

3)加入1-5g NaCl，搅拌至完全溶解；

4)再加入50-100mL的甘油，混合均匀；

5)用纯化水定容至1L；

6)用pH计测定其pH值，用6M HCl或2M NaOH调整pH值在8.0±0.2范围内的要求。

4.根据权利要求2所述的乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，其特征在于：步骤3)中，HBsAg重组抗原透析后，其中的DTT含量为1-5mmol/L。

5.根据权利要求1所述的乙型肝炎表面抗体检测试剂盒，其特征在于：还包括化学发光底物液，其配制包括如下步骤，

1)量取900mL的纯化水；

2)向步骤1)的纯化水中分别添加0.1-0.5g AMPPD，0.05-0.1g Na2SO3，2-10gSDS(十二烷基硫酸钠)，5-10g Tris，搅拌至完全溶解；

3)向步骤2)的溶液中分别添加0.02-0.1mL Tween-20和1-3mL ProclinTM300，定容至1L；

4)调节pH至9.0±0.20，储存于2～8℃。