[发明专利]犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测引物、方法与试剂盒

说明书

一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测引物、方法与试剂盒，该方法用于对细粒棘球绦虫与多房棘球绦虫两种绦虫，以及对微小隐孢子虫与犬隐孢子虫两种孢子虫的检测。本发明所提供的犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测方法，能够在一个反应体系中，同时扩增四种寄生虫的特定基因片段，弥补了形态学中，采用电镜观察所存在的检出率低，检测准确性差，费时费力的不足。本发明所建立的检测方法具有特异性高、灵敏性高的特点，可实现单样本多病原高通量的检测，既节约了单个样本检测成本，又提高了检出率，同时检测准确度也得到了极大程度地提升。本发明中所包含的三组引物，满足了多重PCR检测的要求，其具有深远的经济价值和社会效益。

技术领域

本发明涉及微生物测定技术领域，更具体地说，特别涉及一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测引物与一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测方法以及一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测试剂盒。

背景技术

寄生虫侵入宿主，可在宿主体内产生多种有害作用，例如夺取其营养，造成宿主营养不良，或者在宿主机体内部造成机械性损伤，再或者寄生虫产生毒素，对宿主造成毒性作用，这些有害作用都会严重影响宿主发育。

动物感染寄生虫后，许多寄生虫的虫卵、卵囊或者幼虫可随宿主的粪便排出体外，通过检查动物粪便，可以确认动物是否感染寄生虫以及感染的种类。

对于动物是否感染寄生虫，通常的确认方法为对动物的粪便进行电镜观察，但是，由于许多寄生虫的虫卵或者卵囊近似，通过电镜观察的方法就容易造成错检的问题。

发明内容

综上所述，如何提高动物寄生虫检验的准确性，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测引物，所述的绦虫为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫，所述的孢子虫为微小隐孢子虫和犬隐孢子虫；

所述的引物为：

细粒棘球绦虫引物1：5'-CGTTGTCCTCGTCGTATT-3'；

细粒棘球绦虫引物2：5'-AACAGCCGTCTTCACATC-3'；

目标片段长度515bp；

多房棘球绦虫引物1：5'-TTGATTATTGGAGGCTATGC-3'；

多房棘球绦虫引物2：5'-CAACGACAACATAACATCAC-3'；

目标片段长度353bp；

微小隐孢子虫和犬隐孢子虫共用引物1：5'-CTCAACTCAAGCCACCAT-3'；

微小隐孢子虫和犬隐孢子虫共用引物2：5'-CCGACCAAGACAACATCA-3'；

目标片段长度186bp。

本发明提供了一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测试剂盒，所述的绦虫为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫，所述的孢子虫为微小隐孢子虫和犬隐孢子虫；所述试剂盒中包含如权利要求1中全部所述的引物。

优选地，在本发明所提供的犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测试剂盒中，所述试剂盒中用于进行所述三重PCR检测的反应体系如下：按体积份数计，包括：20-25份的PCR缓冲液、4-6份的全部引物（等量）、2-3份的含脱氧核糖的脱氧核苷三磷酸以及50-60份的DECP水。

本发明提供了一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测方法，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的。