[发明专利]犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测引物、方法与试剂盒在审
| 申请号： | 202010595505.2 | 申请日： | 2020-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN111607656A | 公开（公告）日： | 2020-09-01 |
| 发明（设计）人： | 杨帆;马春江;张志新;阿不都热衣木·赛提;方先珍;张国新;买吾兰·孜克牙;张婉琪;张军;玉努斯·阿不都;杨夷平;关团;陈建豪;段进刚;阿达来提·尤素甫;古丽巴哈尔·卡德尔;杨康;帕提古丽·吾马尔;坤巴哈斯·沙合依;葛忠 | 申请（专利权）人： | 哈密市动物疫病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6893 | 分类号： | C12Q1/6893;C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 839000 新疆维吾尔自*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 粪便 绦虫 孢子 三重 pcr 检测 引物 方法 试剂盒 | ||
1.一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测引物，其特征在于，
所述的绦虫为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫，所述的孢子虫为微小隐孢子虫和犬隐孢子虫；
所述的引物为：
细粒棘球绦虫引物1：5'-CGTTGTCCTCGTCGTATT-3'；
细粒棘球绦虫引物2：5'-AACAGCCGTCTTCACATC-3'；
目标片段长度515bp；
多房棘球绦虫引物1：5'-TTGATTATTGGAGGCTATGC-3'；
多房棘球绦虫引物2：5'-CAACGACAACATAACATCAC-3'；
目标片段长度353bp；
微小隐孢子虫和犬隐孢子虫共用引物1：5'-CTCAACTCAAGCCACCAT-3'；
微小隐孢子虫和犬隐孢子虫共用引物2：5'-CCGACCAAGACAACATCA-3'；
目标片段长度186bp。
2.一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测试剂盒，其特征在于，
所述的绦虫为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫，所述的孢子虫为微小隐孢子虫和犬隐孢子虫；
所述试剂盒中包含如权利要求1中全部所述的引物。
3.根据权利要求2所述的犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒中用于进行所述三重PCR检测的反应体系如下：
按体积份数计，包括：20-25份的PCR缓冲液、4-6份的全部引物（等量）、2-3份的含脱氧核糖的脱氧核苷三磷酸以及50-60份的DECP水。
4.一种犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测方法，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的，
其特征在于，
包括：制备引物步骤，DNA提取步骤，PCR步骤以及电泳检测步骤；
其中，所述的PCR步骤使用了如权利要求2或3所述的犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测试剂盒。
5.根据权利要求4所述的犬类粪便中绦虫与孢子虫三重PCR检测方法，其特征在于，
在所述的制备引物步骤之前包括引物设计步骤；
在所述的引物设计步骤中，根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、微小隐孢子虫，或，根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、犬隐孢子虫的线粒体基因组序列blast的比对分析结果，基于引物必须具备特异性以及引物拟扩增的DNA片段大小必须具备明显的差异的原则对引物进行设计；
通过所述的引物设计步骤获得的引物如下：
细粒棘球绦虫引物1：5'-CGTTGTCCTCGTCGTATT-3'；
细粒棘球绦虫引物2：5'-AACAGCCGTCTTCACATC-3'；
目标片段长度515bp；
多房棘球绦虫引物1：5'-TTGATTATTGGAGGCTATGC-3'；
多房棘球绦虫引物2：5'-CAACGACAACATAACATCAC-3'；
目标片段长度353bp；
微小隐孢子虫和犬隐孢子虫共用引物1：5'-CTCAACTCAAGCCACCAT-3'；
微小隐孢子虫和犬隐孢子虫共用引物2：5'-CCGACCAAGACAACATCA-3'；
目标片段长度186bp。
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