[发明专利]利用固定化酶制备他汀中间体的方法在审
| 申请号： | 202010588965.2 | 申请日： | 2020-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN111647591A | 公开（公告）日： | 2020-09-11 |
| 发明（设计）人： | 陶荣盛;郑云;朱傅赟;沈青;沈正权;孙梁栋;潘震华;原犇犇;胡海亮;刘萍 | 申请（专利权）人： | 湖州颐盛生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N11/089 | 分类号： | C12N11/089;C12N11/08;C12P13/00;C12P7/62 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 313000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 固定 制备 中间体 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用固定化酶制备他汀中间体的方法，包括如下步骤：
A.使用固定化载体Seplite LX-1000NH和LX-G20将羰基还原酶固定化，得到固定化酶；
B.使用步骤A中得到的固定化酶催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯进行还原反应得到他汀中间体6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯，或者催化(S)-6-氯-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯进行还原反应得到他汀中间体6-氯-(3R,5S)-二羟基己酸叔丁酯。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定化载体是Seplite LX-1000NH。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述羰基还原酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述SEQ ID NO:1由大肠杆菌表达得到。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤A为：将发酵后的大肠杆菌菌体离心，破壁，离心，取上清得粗酶液，在磷酸盐缓冲液中与固定化载体混合、吸附，得到固定化酶。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B的反应体系pH为7.5-8.5。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，反应体系中添加有异丙醇和辅酶NADP+。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，反应温度为30-45℃。
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