[发明专利]一种检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法

说明书

本发明公开了检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其包括，提纯AD7c‑NTP单克隆抗体1；制备单克隆抗体结合垫：将偶联AD7c‑NTP单克隆抗体1的荧光微球喷涂于聚酯膜上，制得单克隆抗体结合垫；制备硝酸纤维素包被膜：将AD7c‑NTP单克隆抗体2、标记抗体IgG喷涂在硝酸纤维素膜上分别作为检测带及质控带抗体；制备样品垫。本发明能够实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高、误差小、检测限低，为临床使用提供了极大的便利。

技术领域

本发明属于阿尔茨海默病免疫荧光层析试纸制备方法技术领域，具体涉及一种检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法。

背景技术

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD，又叫老年性痴呆)是一种起病隐袭、进行性发展的慢性神经退行性疾病，是一种严重的智力致残症。随着人口老龄化的高速发展，AD已成为继心脏病、癌症、中风之后，导致老年人死亡的第四大病因，也是花费最多的三种疾病之一(仅次于肿瘤和心脏病)。病人从轻度记忆与认知障碍到最后的植物状态，要经历几年甚至几十年，这对病人和家属都是一个痛苦的过程。AD不是自然衰老，是疾病，早发现，早干预，早治疗，至关重要。

阿尔茨海默症相关神经丝蛋白(AD-associated neuronalthread protein，AD7C-NTP)是一种安全、有效的生物标记物，在AD诊断有着重要意义，具有广阔的应用前景。AD7C-NTP隶属于神经丝蛋白家族，是一种相对分子质量为41000的跨膜磷蛋白。AD7C-NTP自神经元胞体中表达后，广泛存在于神经细胞发生的轴突中，并大量出现在AD患者脑中的NFTs里，呈分泌性上调表达。研究表明，AD7C-NTP在神经元中的沉积在神经元变性早期即可出现，并且发生在NFTs形成之前，在早期AD患者的脑组织抽提物、脑脊液、尿液中均可以检测到AD7C-NTP。同时AD7C-NTP含量水平随病程延长和痴呆严重程度呈正相关逐渐增高，这可能是由于AD患者脑组织NTP免疫活性及信使RNA表达增强，导致神经元细胞凋亡增多，继而使死亡细胞释放大量的AD7C-NTP。神经元胞体和神经突触的丢失、神经元结构蛋白功能受损等病理过程，可以使AD7C-NTP表达升高。

血液检测Aβ和Tau蛋白虽然微创、快速、便捷，但迄今为止其敏感性和特异性较难达到诊断要求。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

作为本发明其中一个方面，本发明提供一种检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其包括，

提纯AD7c-NTP单克隆抗体1；

制备单克隆抗体结合垫：将偶联AD7c-NTP单克隆抗体1的荧光微球喷涂于聚酯膜上，制得单克隆抗体结合垫；

制备硝酸纤维素包被膜：将AD7c-NTP单克隆抗体2、标记抗体IgG喷涂在硝酸纤维素膜上分别作为检测带及质控带抗体；

制备样品垫。

作为本发明所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：所述提纯AD7c-NTP单克隆抗体1，为4℃条件下，用浓度为0.05mol/L，pH值为7.2～7.6的磷酸缓冲溶液对AD7c-NTP单克隆抗体1进行透析提纯处理；所述AD7c-NTP单克隆抗体1，选自商品化抗体ADJ700912。