[发明专利]一种检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法

权利要求书

1.一种检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：包括，

提纯AD7c-NTP单克隆抗体1；

制备单克隆抗体结合垫：将偶联AD7c-NTP单克隆抗体1的荧光微球喷涂于聚酯膜上，制得单克隆抗体结合垫；

制备硝酸纤维素包被膜：将AD7c-NTP单克隆抗体2、标记抗体IgG喷涂在硝酸纤维素膜上分别作为检测带及质控带抗体；

制备样品垫。

2.如权利要求1所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述提纯AD7c-NTP单克隆抗体1，为4℃条件下，用浓度为0.05mol/L，pH值为7.2～7.6的磷酸缓冲溶液对AD7c-NTP单克隆抗体1进行透析提纯处理；所述AD7c-NTP单克隆抗体1，选自商品化抗体ADJ700912。

3.如权利要求1或2所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述荧光微球为包裹有荧光染料且表面修饰有氨基或羧基的聚苯乙烯球，其平均粒径为200nm。

4.如权利要求3所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述制备单克隆抗体结合垫，其为，首先用浓度为0.05mol/L，pH值为7.4的MES冲溶液对荧光微球进行洗涤处理，并将荧光微球质量浓度调整为1％，然后用碳二亚胺和N-羟基琥珀亚酰胺共价偶联的方式将AD7c-NTP单克隆抗体1标记在所述荧光微球上；再使用定量喷膜仪以4μl/cm²的量将标记有AD7c-NTP单克隆抗体1喷涂于聚酯膜上，抗体与微球的质量比例1：20～80，避光条件下35～38℃烘干1小时，制得单克隆抗体结合垫，加入干燥剂封存备用。

5.如权利要求1所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述制备硝酸纤维素包被膜，为使用含有1wt％蔗糖的浓度为0.05mol/L，pH值为7.4的磷酸缓冲溶液分别将AD7c-NTP单克隆抗体2、兔抗鼠IgG抗体稀释至1mg/ml的浓度，再使用定量喷膜仪以1μl/cm²的量将二者间隔喷涂在硝酸纤维素膜上，37℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用；所述AD7c-NTP单克隆抗体2，选自商品化抗体ADH800134。

6.如权利要求1所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述制备样品垫，为用含有1wt％BSA、0.1wt％tritonx-100的浓度为0.02mol/L，pH值为7.4的磷酸缓冲溶液浸泡玻璃纤维素膜1h，37℃烘干3h，制得样品垫。

7.如权利要求4所述的检测尿液中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述共价偶联，其步骤为，

配置50mM的MES反应缓冲溶液，pH值为6.0；

将单克隆抗体1溶解于反应缓冲液中，蛋白浓度为10mg/ml；

用反应缓冲液稀释微球，使其浓度为1％(w/v)；

将单克隆抗体1与微球混合，混合后在室温培育20分钟；

用去离子水配制EDAC溶液，浓度为10mg/ml；

量取EDAC溶液加到单克隆抗体1与微球的混合液中；

用0.1M的氢氧化钠溶液调整反应溶液的pH值至6.5，混合后在室温摇床上培育2小时；将未结合的抗体除去，放4℃冷藏冰箱待用。