[发明专利]一种支原体的通用PCR检测方法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种支原体通用PCR检测方法，其特征在于选用了细菌16S rRNA的V6高变区和V9高变区为上下游引物设计目标区段建立的PCR方法，可以用于细胞、毒种、血清和生物制品等的支原体检验。

2.如权利要求1所述一种支原体通用PCR检测方法，其特征在于所述的序列为：

上游引物MF20.1：5’-gcaaarctat rgarayatag yvgag-3’，25bp(序列1)

上游引物MF20.2：5’-gcaaaggctt agaaataagt tcggag-3’，26bp(序列2)

下游引物MR21：5’-ccarctcyca trgtktgacg g-3’，21bp(序列3)。

3.如权利要求1中所述的支原体通用PCR检测方法，其特征在于该方法关键反应条件在于退火温度为56℃。

4.如权利要求1中所述的支原体通用PCR检测方法，其特征在于该方法的判定标准为扩增产物使用琼脂糖凝胶电泳后，如果出现396bp～413bp的特异性条带，则表明待检测样品为支原体阳性；如果不出现396bp～413bp的特异性条带，则表明待检测样品为支原体阴性。

5.如权利要求1中所述的支原体通用PCR检测方法，其特征在于该方法检测用的检测试剂盒包括：PCR试剂和特异性引物，不包括核酸提取试剂。试剂盒组装内容包括：(1)PCR试剂，包括Taq DNA Polymerase(recombinant)、MgCl2、dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)、染料等，单独或按照一定比例配制成混合物(如：2×Taq PCR Mix)(2)引物，由上游引物MF20.1/MF20.2(序列1/序列2)按摩尔数2:1混合后，再一并与下游引物MR21(序列3)按摩尔数等量混合配制，上下游引物终浓度均为10～25μmol/L；(3)阳性对照；(4)超纯水。

6.如权利要求1中所述的支原体通用PCR检测方法，其特征在于该方法检测用的检测试剂盒包括：核酸提取试剂、PCR试剂、特异性引物等。试剂盒组装内容包括：(1)核酸提取试剂；(2)PCR试剂，包括Taq DNA Polymerase(recombinant)、MgCl2、dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)、染料等，单独或按照一定比例配制成混合物(如：2×Taq PCR Mix)；(3)引物，由上游引物MF20.1/MF20.2(序列1/序列2)按摩尔数2:1混合后，再一并与下游引物MR21(序列3)按摩尔数等量混合配制，上下游引物终浓度均为10～25μmol/L；(4)阳性对照；(5)超纯水。