[发明专利]一种高效杀伤细胞体外培养试剂盒及培养方法

说明书

本发明涉及一种高效杀伤细胞体外培养试剂盒，包括，主要成分为Anti‑CD3抗体及注射用肝素钠的包被液，主要成分为抗人CD28抗体、IL‑2、IL‑1α、沙培林的诱导液，主要成分为IL‑2、IL‑21的扩增液。本发明构建了一种NK及CIK细胞体外共培养的试剂盒，既降低了细胞培养成本，又提高了细胞培养的安全性，使NK及CIK细胞的培养标准化、简单化。

技术领域

本发明属于免疫细胞治疗技术领域，涉及一种高效杀伤细胞(CNK)体外培养试剂盒及培养方法。

技术背景

从上个世纪八九十年代起，过继性细胞治疗技术应用于肿瘤免疫治疗研究领域一直是热点质疑，主要包括淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、自然杀伤细胞(NK)、自然杀伤T细胞(NKT)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)等。

自然杀伤细胞(Natural Killer Cells；NK)在抗病毒、抗肿瘤及抗感染等免疫防御中扮演重要的角色。由于NK细胞不表达T、B淋巴细胞具有的抗原识别受体(TCR或BCR)，以及其他特有标志而曾经被称为裸细胞。通常将CD₃^-、TCR^-、BCR^-、CD₅₆⁺、CD₁₆⁺的淋巴细胞认为是NK细胞。其中又以CD₅₆⁺的表达密度不同将其分为CD₅₆^bright和CD₅₆^dim，前者高表达CD₅₆、CD₉₄/NKG2A和CD₆₂L；后者高表达CD₁₆、PEN5、KIR和FLA-1。]NK细胞杀伤肿瘤不受MHC限制，也无需预先致敏，其表面存在的大量不同的特异性和反应活性受体与靶细胞配体相结合，激活NK细胞产生细胞毒性作用。NK细胞主要通过其表面的杀伤细胞活化受体(Killer activationreceptor，KAR)及杀伤细胞抑制受体(Killer inhibitory receptor，KIR)。在正常机体反应中，KIR与细胞表面的MHCI类分子结合产生抑制信号；并且相对于糖类抗原与KAR结合产生的活化信号占主导地位，而当细胞产生病变时表面的MHCI类分子表达降低或者缺失，NK被活化释放细胞毒性颗粒等杀伤病变细胞。

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine inducedkiller cells,CIK)是由人外周血单个核细胞在体外经过多种细胞因子共同诱导得到的一群异质细胞。CIK细胞同时表达CD₃和CD₅₆两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞样T淋巴细胞，兼具T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤优点。在正常人外周血中较为罕见CD₃⁺CD₅₆⁺仅占1％-5％，但经过体外多因子联合培养后增值倍数可达500倍以上。CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等特点而被广泛用于过继性免疫治疗中。