[发明专利]一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法

说明书

本发明公开了一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法，建立同时分析测定新疆野山杏果肉中4种黄酮类化合物的高效液相色谱分析方法。采用Hubble C18色谱柱，流动相甲醇:0.5％磷酸水溶液＝45:55，在1.0ml/min流速下等度洗脱，分离新疆野山杏果肉中4种黄酮类化合物，通过仪器精密度、稳定性、重复性及添加回收率对该方法进行验证。芦丁、槲皮素、原花青素3种黄酮成分色谱峰在20min内分离度良好，线性范围为0.52～56μg/mL，加样回收率为92.13％～96.70％，RSD为0.89％～1.96％。该方法简便、快速、准确、稳定性及重复性好，适合推广应用。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体地说，涉及一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法。

背景技术

野山杏〔Armeniaca sibirica(L.)Lam.〕果肉中含有多种黄酮类化合物，黄酮类化合物具有多种生物活性及药理作用，也是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。近年来国内外学者对黄酮及黄酮类化合物的不同分析检测方法进行了探究，其高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有灵敏度高、流动相和色谱柱选择范围广、分析速度快、流出组分易收集等特点，故选择该方法进行成分分析较普遍。如张元梅等研究利用高效液相法同时检测柑橘果实中18种黄酮类化合物的含量，具有良好的分离效果；左月明等等采用RP-HPLC法在40min内梯度洗脱同时检测出三白草药材中芦丁、槲皮素等黄酮类化合物的含量；WANG等在流速1.0ml/min下梯度洗脱25min内同时分离检测冷蒿地上部分7种黄酮类化合物含量。关于野山杏黄酮及黄酮化合物的提取及分离方面报道较少，故本发明拟通过高效液相色谱法建立一种简便、快速、准确的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提出了一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法，该方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法，通过考察检测波长、流动相、流速、柱温等因素确定色谱条件，通过系统适用性试验、精密度实验、稳定性实验、重复性实验、加样回收率实验等对野山杏果肉中4种黄酮类化合物的含量分析方法进行验证。本发明为进一步探讨新疆野山杏总黄酮的提取分离奠定实验基础，为开发利用新疆特色药食同源植物提供理论依据。

其技术方案如下：

一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法，包括以下步骤：

步骤1、溶液的制备

1.1)对照品溶液的配制

称取原花青素、芦丁、柚皮苷二氢查尔酮、槲皮素4种对照品各10.00±0.20mg，用甲醇溶解并分别定容至25mL容量瓶中，摇匀，即得对照品溶液。

1.2)混标储备液

分别取上述步骤1.1)中溶液各2.50mL，混合均匀，制得含有原花青素106.00ug/ml、芦丁103.00ug/ml、柚皮苷二氢查尔酮112.00ug/mL、槲皮素104.00ug/ml的混标储备液。

1.3)混标中间液

准确量取5mL混标溶液甲醇定容至10mL，制得含有原花青素53.00ug/ml、芦丁51.50ug/ml、柚皮苷二氢查尔酮56.00ug/mL、槲皮素52.00ug/ml混标中间液。

1.4)混标标准工作液

分别取0.25、0.50、1.00、2.00mL中间液甲醇定容至10ml容量瓶，摇匀，配制标准工作液上机待测。

1.5)供试品溶液的配制

取1g野山杏干燥果肉，粉碎，过40目筛，加50％乙醇(料液比1:50)，70℃下超声1h，超声提取2次，抽滤，合并滤液旋蒸浓缩后，用甲醇定容至10mL，摇匀，制成供试品溶液，测定前用微孔滤膜(0.22μm)过滤，备用。