[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2020105，能够分泌抗人血清白蛋白的单克隆抗体，单克隆抗体的腹水间接ELISA效价大于10^‑5，IAC纯化的纯度高达99.971％。利用本发明获得的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，可用于极微量白蛋白的检测、残留量白蛋白的检测、制备纯化亲和层析柱和免疫学检测试剂盒等，稳定性好，保质期长。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体制备领域，具体地，是一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用。

背景技术

人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)是由585个氨基酸组成的单链无糖基化的蛋白质，分子量约66.5KD。HSA于肝脏中合成，是血浆中含量最丰富的蛋白质(血浆中的HSA下文简称pHSA)，约占血浆总蛋白的60％。其主要功能是运输脂肪酸、氨基酸等营养物质，同时能够维持血液渗透压的平衡，稳定血浆内环境。临床上用于治疗休克、烧伤以及大出血导致的血液流失，同时也是国家的储备药物之一。一直以来HSA的生产是以人血液为原料通过低温乙醇法进行提取的，但是人血来源有限，且血液可能携带乙肝、艾滋等病毒，引发病毒传染的安全性问题。

DNA重组与合成技术的发展，使重组人血清白蛋白(rHSA)的生产和应用得到实现。以毕赤酵母作为蛋白表达系统，高密度发酵生产白蛋白，不仅可以避免原料紧张和病毒污染等问题，还可以实现大规模生产。HSA的临床使用剂量很大，每针剂通常达到10～25g，因此对重组白蛋白的纯度要求非常严格。通常以基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵所得的rHSA为原料，通过各种纯化方法将发酵液中的杂质一一去除。当rHSA纯度大于99％时，进一步的纯化操作异常艰难。免疫亲和层析(IAC)依靠抗原与抗体结合的特异性，能够准确捕获混合物中的目标蛋白，获得高纯度产物。

杂交瘤细胞是由脾细胞和骨髓瘤细胞融合而成，但是其基因表达不稳定，容易在传代培养和冻存中逐渐丢失染色体，导致抗体产生能力减弱或丧失(李莉等，抗人血白蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制，中国卫生检验杂志，2007，017(011):2028-2029,2051.及余健等，牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定，微生物学免疫学进展，2007(01):32-36.)，因此急需一种能稳定生产HSA抗体的杂交瘤细胞。免疫亲和层析柱的制备和纯化技术虽已有报道(王迪等，莱克多巴胺免疫亲和柱的制备与应用研究，分析测试学报，2010(08):58-62.及徐燕等，去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备研究，中国食品学报，2011(07):201-205.)，但是其柱容量多为纳克级，已知最高柱容量的是草鱼生长激素单抗免疫亲和柱，柱容量为70μg/ml，且重复性和稳定性都不高，数据显示免疫亲和柱一般可使用3次，4℃只可存放三个月。柱容量、重复性和稳定性是免疫亲和层析柱存在的主要问题，严重影响免疫亲和层析的使用和推广。本领域急需一种具有较大柱容量，并可重复性和稳定性均较高的可除去HSA中杂质的层析柱。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服现有杂交瘤细胞制备单克隆抗体中细胞和分泌的抗体稳定性低，亲和层析柱柱容量、重复性和稳定性低导致单克隆抗体纯度难以进一步提高的缺陷，提供一种人血清白蛋白单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及其应用，杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在亲和层析柱中可以实现不正确空间结构的重组人血清白蛋白的去除，提高人血清白蛋白的纯度。

本发明的第一方面涉及一种可分泌抗人血清白蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2020105。

本发明的第二方面涉及上述第一方面的杂交瘤细胞株分泌的抗人血清白蛋白的单克隆抗体。

本发明的第三方面涉及上述第一方面的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

1)将SP2/0小鼠骨髓瘤细胞，与用人血清白蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠的脾脏细胞融合，在选择培养基中进行杂交瘤细胞筛选；