[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用

权利要求书

1.一种可分泌抗人血清白蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2020105。

2.一种如权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的抗人血清白蛋白的单克隆抗体。

3.一种制备如权利要求1所述的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将SP2/0小鼠骨髓瘤细胞，与用人血清白蛋白作为抗原免疫的Balb/c小鼠的脾脏细胞融合，在选择培养基中进行杂交瘤细胞筛选；

优选地，所述的选择培养基为HAT培养基；

2)将步骤1)中筛选出的阳性杂交瘤细胞在含FBS的基础培养基中进行筛选，获得稳定分泌抗人血清白蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

优选地，所述的基础培养基为HAT培养基。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的FBS的体积分数大于等于20％；筛选的次数大于等于二次、小于等于六次；优选地，所述步骤2)中的FBS的体积分数为20％，筛选的次数为四次。

5.一种纯化人血清白蛋白的免疫亲和层析方法，其特征在于，所述的免疫亲和层析方法包括以下步骤：

(1)将如权利要求2所述的单克隆抗体与琼脂糖凝胶，优选CNBr-Sepharose 4B，偶联后装柱、封闭并洗涤，获得制备好的免疫亲和层析柱；

(2)平衡后，将含有人血清白蛋白的上样液上样至制备好的免疫亲和层析柱，洗涤并洗脱获得含高纯度目标蛋白的洗脱液；其中，所述人血清白蛋白例如血浆人血清白蛋白或重组人血清白蛋白；

(3)将获得的含高纯度目标蛋白的洗脱液用中和缓冲液调整pH为中性并浓缩即得。

6.如权利要求5所述的免疫亲和层析方法，其特征在于，

在步骤(1)中，所述单克隆抗体优选用偶联缓冲液透析过夜；所述偶联缓冲液为0.1MNaHCO₃，0.5M NaCl，pH 8.3；和/或，所述装柱后，用偶联缓冲液洗去未偶联的单克隆抗体，并用封闭缓冲液封闭，所述偶联缓冲液的体积为5～10倍柱体积，所述封闭缓冲液的体积为5倍柱体积的0.1M Tris-HCl，pH 8.0；和/或，所述洗涤为用醋酸缓冲液和Tris-HCl缓冲液交替洗涤填料，重复4～5次，然后用PBS缓冲液反复洗涤至填料为中性，其中所述醋酸缓冲液优选为含0.5mol/L NaCl的0.1mol/L醋酸缓冲液，pH 4.0，5倍柱体积，所述Tris-HCl缓冲液优选为含0.5mol/L NaCl的0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.0，所述PBS缓冲液优选为10倍柱体积；

和/或，在步骤(2)中，所述上样液使用的上样缓冲液、平衡和洗涤使用的缓冲液为20mMNa₂HPO₄-NaH₂PO₄+0.1M NaCl，pH为7.5；所述洗脱使用的洗脱液为20mM甘氨酸-HCl，pH为2.5；

和/或，在步骤(3)中，所述中和缓冲液为3M Tris-HCl，pH为9.0。

7.一种如权利要求5或6所述的免疫亲和层析方法中制得的免疫亲和层析柱。

8.一种用于免疫学检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的杂交瘤细胞株，或者如权利要求2所述的单克隆抗体；

优选地，所述试剂盒还包括检测板、酶标抗体、显色液和终止液。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为极微量或残留量白蛋白检测试剂盒、尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒或糖化血清白蛋白检测试剂盒。

10.一种如权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体在制备检测人血清白蛋白的试剂中的应用。