[发明专利]一种肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体及其在人工驯化栽培中的应用

说明书

本发明公开了一种肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体及其在人工驯化栽培中的应用。该肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为：CGMCC No.18584。本发明涉及的肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体可采用玉米粉培养基平板继代扩繁，可采用小米粒培养基制作栽培菌种，可采用玉米芯培养料及熟料袋栽模式获得子实体。本发明提供了一种野生食药用菌的纯培养菌丝体及人工栽培方法，且该菌丝体为高温型，适合夏秋高温季节人工栽培，不仅为食用菌产业提供了新品种，而且对保护野生蕈菌的多样性也具有重要意义。

技术领域

本发明属食用菌栽培领域，具体涉及一种肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体及 其在人工驯化栽培中的应用。

背景技术

肉质黑孢孔菌(Amylosporus succulentus)属于黑孢孔菌属，该属于1973 年由Ryvarden建立，其模式种为坎氏黑孢孔菌(A.campbellii)。野生肉质 黑孢孔菌主要分布于热带地区，子实体为一年生，新鲜子实体为肉质，干 品为木栓质。子实体菌盖圆形，边缘较薄、波浪形，表面颜色白色或淡粉 色；菌褶为孔状，孔口形状为多角形，颜色为浅黄色，易破碎。孢子椭圆 形、无色，细胞壁稍厚，表面粗糙。肉质黑孢孔菌发现较晚，至今对其生 物学特性及驯化栽培研究均鲜有报道。2018年，黄福常等报道了黑孢孔菌 属的另一个种——纹盖黑孢孔菌(Amylosporus sulcatus)并对其人工驯化栽 培及子实体营养情况进行了研究，认为纹盖黑孢孔菌可作为新的食用菌品 种进行开发利用。纹盖黑孢孔菌与肉质黑孢孔菌在分类学上为黑孢孔菌属 的两个独立种。2017年8月，发明人在河北省燕山地区进行野生大型真菌 资源调查时，采集到的该菌子实体并分离获得纯培养菌丝体，同时开展了 驯化栽培研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体及其在人工驯化 栽培中的应用。

实现本发明的目的采取的技术方案是这样的：首先获得肉质黑孢孔菌纯 培养菌丝体并对其真实性进行鉴定；成功获得纯培养菌丝体后，若实现人工 驯化栽培第一步就要筛选其最适合生长的培养基，实现菌种扩繁，然后根据 对其生活环境特点进行人工驯化栽培，具体如下：

(1)肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体获得与鉴定

以采集到的野生肉质黑孢孔菌子实体为材料，通过组织分离技术，从子 实体菌盖中部取规格为2×2×2mm大小的组织块，接种到常规PDA试管斜面 培养基上，在20～25℃培养箱中进行避光培养，10～15d后获得长满试管斜面 培养基的菌丝体，于4℃冰箱中保存备用。

对获得的菌丝体进行ITS鉴定，同时对菌丝体来源的子实体进行同样ITS 鉴定。采用真菌DNA提取试剂盒，分别制备菌丝体DNA和子实体DNA，然 后，分别以2种DNA为模板，建立包含ITS引物在内的PCR扩增体系，将 获得的扩增产物进行测序，测序得到的ITS序列于NCBI的数据库进行 BLAST比对分析，最终确定获得的菌丝体与子实体的ITS序列相同，证明菌 丝体来源于子实体；且其与数据库中的肉质黑孢孔菌ITS序列高度同源，故 将获得的纯培养菌丝体和子实体鉴定为肉质黑孢孔菌。

获得的肉质黑孢孔菌纯培养菌丝体，现在中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心保藏，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号中国科学院微生物所。保藏编号为：CGMCC No.18584。保藏日期为2019 年10月10日，分类命名为：Amylosporussucculentus。

(2)菌丝体的继代扩繁

从冰箱保藏的肉质黑孢孔菌菌丝体试管斜面培养基上挑取规格为2×2 mm大小的菌丝体块，接种于PDA平板培养基上，在20～25℃条件下，经过 15-20d培养后，使用直径为0.7cm的圆形打孔器沿菌丝体菌落边缘打孔取菌 片，将圆形菌片接种于玉米粉培养基平板上继代扩繁，在20～25℃、避光培养 条件下，15～20d后获得长满菌丝体的平板扩繁菌种。实现的了菌丝体的继代 扩繁。

(3)驯化栽培菌种制备