[发明专利]一种美登木素衍生物及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种美登木素衍生物，其特征在于，化学结构如下所示：

2.如权利要求1所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用YMG培养基对表达有丙氨酰化酶的珍贵橙色束丝放线菌(Actinosynnemapretiosum ssp.autantium ATCC 31565)的突变株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC进行15L固体发酵，28-30℃培养7-10天；

(2)将培养物切成小块，室温下用体积比80:20的乙酸乙酯/甲醇浸泡提取三次，合并提取液，减压及38-40℃的温度下浓缩至干，得粗提物；

(3)用水溶解粗提物，使用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相减压及38-40℃的温度下浓缩至干得EA提取物；

(4)EA提取物溶于甲醇，再经石油醚多次萃取，甲醇相减压及38-40℃的温度下浓缩至干得甲醇提取物；

(5)甲醇提取物依次经反相硅胶柱层析分离，凝胶柱层析分离，薄层层析和制备型HPLC分离将组分相同的洗脱液进行合并得到美登木素衍生物。

3.如权利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述表达有丙氨酰化酶的珍贵橙色束丝放线菌突变株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC的制备方法按如下步骤所述：

(a)将丙氨酰化酶基因astC的开放阅读框插入到质粒pSBT11上的Ned I和EcoR I限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于ermE*启动子的下游并受其调控；

(b)用整合型表达载体pSBT11-astC转化大肠杆菌ET12567/pUZ8002，获得大肠杆菌-放线菌接合转移供体菌ET12567/pUZ8002/pSBT11-astC；

(c)将ET12567/pUZ8002/pSBT11-astC与HGF052+pJTU824-asm18的菌丝体进行接合转移，获得表达有丙氨酰化酶的突变株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC。

4.如权利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，对表达有丙氨酰化酶的珍贵橙色束丝放线菌(Actinosynnema pretiosum ssp.autantium ATCC31565)的突变株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC进行固体发酵，28℃培养10天。

5.如权利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，所述提取采用的甲醇为95％甲醇。

6.如权利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步骤(5)中，所述反相硅胶柱、制备型HPLC柱填料为C-18、凝胶柱型号为Sephadex LH-20。

7.如权利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步骤(5)中，对甲醇提取物进行分离的步骤为：

甲醇提取物首先经反相硅胶柱层析分离，分别用水，30％，50％，70％，100％甲醇依次洗脱，每个组分洗脱1L，200mL/份接收，TLC检测，用CH₂Cl₂：MeOH＝10:1v/v展开，碘化铋钾显色，合并70％洗脱组分；继续用凝胶柱层析分离，甲醇洗脱，5mL/管,合并25-29管；继续用制备型HPLC分离，流动相为体积百分比38％乙腈，收集目标峰，得到美登木素衍生物1。

8.权利要求1所述美登木素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.如权利要求8所述美登木素衍生物的应用，其特征在于，所述的肿瘤为宫颈癌、结肠癌或乳腺癌。

10.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述美登木素衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。