[发明专利]通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法

说明书

本申请公开了一种通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，包括：取预热的透明质酸酶溶液加到血清蛋白样本上，在18～37℃的温度条件下消化处理10～60分钟后清洗；然后取预热至18～37℃的胃蛋白酶溶液加到血清蛋白样本上，在18～37℃的温度条件下消化处理20～60分钟后清洗，即可完成抗原修复；所述透明质酸酶溶液中，透明质酸酶的浓度为1.5～2.2mg/ml，pH值为4.5～6.0；所述胃蛋白酶溶液中，胃蛋白酶的质量体积比浓度为0.3～0.4％，pH值为1.0～2.5。使用本发明的抗原修复试剂盒能够克服传统抗原修复方法具有的掉片率高、抗原暴露不充分的问题。此外，采用本发明的抗原修复方法处理后可以被极大程度地降低。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，具体涉及通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法。

背景技术

血清白蛋白(HSA)是人血浆的主要组成性蛋白质，其含量约占血浆总蛋白质的50％以上。在人的正常生理条件下，人血浆白蛋白具有维持血浆胶体渗透压、营养和促进伤口愈合的作用，而且其作为载体物质，参与诸多疏水性生物分子如激素、生物学活性物质及药物等在血液中的运输。基于人血清白蛋白的这些重要生理学功能，该蛋白质在临床上具有十分重要的治疗应用价值，可用于治疗各种以血浆白蛋白丢失或白蛋白合成减少为基本特征之一的疾病，例如治疗各种创伤、烧伤、外科手术过程中或手术后失血，以及许多慢性消耗性疾病。

但是，目前尚没有通过血清蛋白重组进行免疫抗原修复的方法，成为人们亟待解决的问题。

发明内容

本申请的主要目的在于提供一种通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，以解决现有技术中没有通过血清蛋白重组进行免疫抗原修复的方法的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，包括以下步骤：取预热的透明质酸酶溶液加到血清蛋白样本上，在18～37℃的温度条件下消化处理10～60分钟后清洗；然后取预热至18～37℃的胃蛋白酶溶液加到血清蛋白样本上，在18～37℃的温度条件下消化处理20～60分钟后清洗，即可完成抗原修复；所述透明质酸酶溶液中，透明质酸酶的浓度为1.5～2.2mg/ml，pH值为4.5～6.0；所述胃蛋白酶溶液中，胃蛋白酶的质量体积比浓度为0.3～0.4％，pH值为1.0～2.5。

进一步的，所述透明质酸酶消化处理的温度为23～28℃，所述胃蛋白酶消化处理的温度为23～28℃。

进一步的，所述透明质酸酶溶液的溶剂为去离子水；所述胃蛋白酶溶液的溶剂为HCl水溶液。

进一步的，所述血清蛋白样本的制备方法包括以下步骤：

(1)酵母细胞在培养基中培养，使细胞培养物的OD 600值达到4.0；

(2)收集细胞并在无菌条件下，接种到含BMGY培养基的发酵罐内，在30℃下通气发酵；

(3)当甘油逐渐消耗后，向罐内加入含甲醇但不含甘油的BMMY培养基，30℃下继续进行补料分批培养，发酵后20小时开始收集培养物；

(4)离心收集培养物上清液，加热处理后冷却，离心去除包括微量蛋白酶在内的热变杂质后再过滤，浓缩后将其PH调节到4.5，再进行脱色，洗脱，并收集洗脱部分，最后将该洗脱液脱盐即得所述的血清白蛋白。

进一步的，步骤(1)中的培养基为BMGY培养基。

进一步的，步骤(2)中，罐内溶解氧保持在25％以上空气饱和度。

进一步的，步骤(3)中，分批培养阶段内发酵罐中的甲醇浓度始终保持在0.4％-0.5％。