[发明专利]通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法

权利要求书

1.通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，包括以下步骤：取预热的透明质酸酶溶液加到血清蛋白样本上，在18～37℃的温度条件下消化处理10～60分钟后清洗；然后取预热至18～37℃的胃蛋白酶溶液加到血清蛋白样本上，在18～37℃的温度条件下消化处理20～60分钟后清洗，即可完成抗原修复；所述透明质酸酶溶液中，透明质酸酶的浓度为1.5～2.2mg/ml，pH值为4.5～6.0；所述胃蛋白酶溶液中，胃蛋白酶的质量体积比浓度为0.3～0.4％，pH值为1.0～2.5。

2.根据权利要求1中所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，所述透明质酸酶消化处理的温度为23～28℃，所述胃蛋白酶消化处理的温度为23～28℃。

3.根据权利要求1中所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，所述透明质酸酶溶液的溶剂为去离子水；所述胃蛋白酶溶液的溶剂为HCl水溶液。

4.根据权利要求1～3中任一所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，所述血清蛋白样本的制备方法包括以下步骤：

(1)酵母细胞在培养基中培养，使细胞培养物的OD 600值达到4.0；

(2)收集细胞并在无菌条件下，接种到含BMGY培养基的发酵罐内，在30℃下通气发酵；

(3)当甘油逐渐消耗后，向罐内加入含甲醇但不含甘油的BMMY培养基，30℃下继续进行补料分批培养，发酵后20小时开始收集培养物；

(4)离心收集培养物上清液，加热处理后冷却，离心去除包括微量蛋白酶在内的热变杂质后再过滤，浓缩后将其PH调节到4.5，再进行脱色，洗脱，并收集洗脱部分，最后将该洗脱液脱盐即得所述的血清白蛋白。

5.根据权利要求4中所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，步骤(1)中的培养基为BMGY培养基。

6.根据权利要求4中所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，步骤(2)中，罐内溶解氧保持在25％以上空气饱和度。

7.根据权利要求4中所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，步骤(3)中，分批培养阶段内发酵罐中的甲醇浓度始终保持在0.4％-0.5％。

8.根据权利要求4中所述通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复方法，其特征在于，步骤四中洗脱后在280nM吸收峰处收集洗脱部分。

9.一种通过血清蛋白重组促发mRNA靶向人源性免疫抗原修复的试剂盒，其特征在于，包括透明质酸酶溶液、胃蛋白酶溶液和PBS洗涤液。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述透明质酸酶溶液的溶剂为去离子水；所述胃蛋白酶溶液的溶剂为HCl水溶液。