[发明专利]一种用于检测嗜水气单胞菌的RPA引物组、探针和试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测嗜水气单胞菌的RPA引物组，其特征在于，所述RPA引物组的序列包括上游引物F和下游引物R；

所述上游引物F选自：

1F：5’-ATCAATCCTGTTACCGGAGAAATACCAA-3’；

2F：5’-GAAATACCAACCTTGTCAGCTCTGGATA-3’；

4F：5’-CAATCACAGCCAATATGTCGGTGAAGAC-3’；

5F：5’-CTACAAGGCTGACATCTCCTATCCCTATGA-3’；

6F：5’-AATACCTGGTGTTACCCGATCAATCCTGTT-3’；

7F：5’-CAAACATGGTGATGTGACCCAGTCTGAT-3’；

8F：5’-CTGTTACCGGAGAAATACCAACCTTGTC-3’；

9F：5’-CAAACATGGTGATGTGACCCAGTCTGAT-3’中的至少一个；

所述下游引物R选自：

1R：5’-AGATAGCTGGTTGGCTTGATAAAATTCG-3’；

2R：5’-GTCACGTCCATGTCTTCACCGACATATTG-3’；

3R：5’-GTCACGTCCATGTCTTCACCGACATATT-3’；

4R：5’-GTTGTACGCAAAATTGCTGACCTTGATG-3’；

5R：5’-TATAGCGCTTGTCCCACTGGTAACGAAT-3’；

6R：5’-TTGATAAAATTCGCGCTGTCGTGTACCAGT-3’；

7R：5’-CTTGAACTTGTTCTTGGTGGTCACCTTCTC-3’；

8R：5’-AGGCATAACCGAGATAATGCGCCAGATAG-3’；

9R：5’-CTTGAACTTGTTCTTGGTGGTCACCTTCTC-3’中的至少一个。

2.根据权利要求1所述的RPA引物组，其特征在于，所述RPA引物组的序列为：

上游引物1F：5’-ATCAATCCTGTTACCGGAGAAATACCAA-3’；

下游引物2R：5’-GTCACGTCCATGTCTTCACCGACATATTG-3’。

3.一种用于检测嗜水气单胞菌的RPA探针，其特征在于，所述RPA探针序列为：5'-CAGTGGCGACTGGTACACGACAGCGCGAAT(荧光基团)T(THF)A(猝灭基团)CAAGCCAACCAGCTATC(修饰基团)-3'。

4.根据权利要求3所述的RPA探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM；所述猝灭基团包括BHQ；所述THF代表四氢呋喃分子；所述修饰基团包括C3-sapcer。

5.一种用于检测嗜水气单胞菌的RPA检测试剂盒，其特征在于，所述RPA检测试剂盒包括权利要求1-2任一所述的引物组、权利要求3-4任一所述的探针、再水化缓冲液、醋酸镁溶液、重组酶。

6.根据权利要求5所述的RPA检测试剂盒，其特征在于，所述RPA检测试剂盒还包括嗜水气单胞菌阳性对照。

7.权利要求5-6任一所述的RPA检测试剂盒在嗜水气单胞菌检测中的应用。

8.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述嗜水气单胞菌的检测步骤包括：

采集样品，提取核苷酸；

将提取的核苷酸与权利要求1-2任一所述的引物组、再水化缓冲液、重组酶混合；

加入醋酸镁溶液，进行RPA扩增；

对RPA扩增产物进行荧光检测；

若检测到荧光，则样品中含有嗜水气单胞菌，若未检测到荧光，则不含有嗜水气单胞菌。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述RPA扩增体系为：

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述RPA扩增条件为：37-39℃扩增18-22分钟。